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將共聚焦與光片顯微成像技術(shù)相結(jié)合，探索新應(yīng)用領(lǐng)域

數(shù)字光片顯微鏡 STELLARIS DLS

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徠卡顯微系統(tǒng)采用獨(dú)特的設(shè)計方法,，使您可以在一個系統(tǒng)中進(jìn)行共聚焦和光片成像,， 實(shí)現(xiàn)柔和的單平面照明。 我們的數(shù)字光片系統(tǒng)(DLS)采用垂直設(shè)計,，可以集成到 STELLARIS 5 和 STELLARIS 8 系統(tǒng)中,，也可以作為兩種系統(tǒng)的升級。 這樣,，您就可以受益于完整功能的共聚焦和易于使用的光片顯微鏡,， 從而能夠進(jìn)行更多樣化的研究。

圖像： 四日齡的斑馬魚胚胎拼接圖像,，已標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞,。 圖像由法國伊爾基希-格拉芬斯塔登遺傳與分子細(xì)胞生物學(xué)研究所 (IGBMC) 影像中心 Elvire Guiot 博士提供。

讓您能夠進(jìn)行更多樣化的研究

在STELLARIS 5或STELLARIS 8系統(tǒng)中添加DLS可令您的研究更加多樣化,，使您能夠通過簡單的樣本處理和多位置實(shí)驗(yàn)輕松進(jìn)行不同類型的三維樣本成像,。

DLS模塊專為改進(jìn)活細(xì)胞成像應(yīng)用而設(shè)計，通過單平面照明以及sCMOS攝像頭進(jìn)行快速成像,，可提高細(xì)胞活性,。 除了活體樣本外，DLS還可以對經(jīng)過透明化處理的樣本成像,，為實(shí)現(xiàn)您的研究目標(biāo)提供更大的靈活性,。

垂直旋轉(zhuǎn)——共聚焦顯微鏡中如何形成光片？

光片顯微鏡通常需要在獨(dú)立系統(tǒng)上構(gòu)建專用的光學(xué)設(shè)置,，即照明和檢測物鏡相互垂直,。 DLS可輕松實(shí)現(xiàn)光片顯微成像。 獨(dú)特的TwinFlect反光鏡裝置將照明光片偏轉(zhuǎn)90度,。 這種改進(jìn)方法可將照明和檢測光路集成到每臺具有倒置顯微鏡的STELLARIS系統(tǒng)的垂直軸中,。 所有這些改進(jìn)方法都不會影響共聚焦功能,。

實(shí)施并進(jìn)行長時間的觀察記錄

成像需要光照，但光照過強(qiáng)會損傷細(xì)胞,。 光片顯微鏡是迄今為止*溫和的成像方法,，因?yàn)樗梢詼p少光毒性和光漂白造成的總體光損傷。 這可以提高樣本的活性,。 光片成像尤其有利于發(fā)育生物學(xué)的研究,。 弱光照明與高速采集相結(jié)合，讓您可以長期跟蹤果蠅胚胎等發(fā)育中的敏感生物體,，并以三維方式實(shí)時了解組織和器官的形成過程,。

光片成像原理

光片顯微鏡對樣本進(jìn)行單平面照明，非常適合敏感樣本或快速生物過程的成像,。

由于不存在離焦激發(fā)，可將光毒性的影響局限于焦平面,。 此外,，通過在光片中移動樣本，您可自動獲得光學(xué)切片,，并可對樣本進(jìn)行三維成像,。

快速采集高分辨率圖像

如果成像速度和分辨率不合適，以三維方式長時間觀察快速周期性生物過程（如斑馬魚心跳）可能具有很大的挑戰(zhàn)性,。 使用DLS模塊,，您可以在兩個先進(jìn)的sCMOS相機(jī)之間進(jìn)行選擇，以出色的分辨率快速采集圖像,，兩個相機(jī)都完全集成在LAS X LightSheet Wizard中,。

探索三維細(xì)胞培養(yǎng)物，一次觀察多個位置

類器官或球狀體等三維細(xì)胞培養(yǎng)物的有效成像構(gòu)成一系列的新挑戰(zhàn),，因?yàn)樗鼈儼艽蟮捏w積,。 類器官既可以被固定、進(jìn)行免疫標(biāo)記,、使用透明化技術(shù)進(jìn)行研究,，也可以利用活體研究其動態(tài)過程。 由于定義了工作流程,，使用DLS研究這些樣本非常簡單,，并且可以提供關(guān)于細(xì)胞和分子過程的重要信息。 DLS非常適合滿足透明細(xì)胞和活細(xì)胞制備的需求,，讓您能夠更好地研究三維細(xì)胞培養(yǎng)物,，這類培養(yǎng)物能夠提供比粘附細(xì)胞的二維細(xì)胞培養(yǎng)物更具生理意義的研究條件。

使用數(shù)字光片顯微鏡探索完整的 3D 細(xì)胞生物學(xué)工作流程 ,。

適用于活體樣本和經(jīng)透明化處理樣本的光片系統(tǒng)

由于生物組織的不透明性,，深層組織顯微成像非常困難,。 這正是越來越多的組織透明化方法發(fā)揮作用的地方，但這對于許多成像系統(tǒng)而言是一大挑戰(zhàn),。

DLS模塊不僅可以提供出色的活體樣本成像結(jié)果,，而且可以對經(jīng)過各種不同透明技術(shù)處理的樣本進(jìn)行成像。 使用DLS,，您可以在多個檢測物鏡與安裝架之間進(jìn)行選擇,，以呈現(xiàn)經(jīng)過透明化處理的組織和生物體內(nèi)的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。

視頻采集條件：

檢測物鏡 HC APO L10x/0.30 W DLS

圖像大?。?1.39mm x 2.04mm（2x3 拼接）

Z軸：1.5mm厚度（2um步長,，745幀）

采集時間：5 分 37 秒

激發(fā)：514納米

發(fā)射： LP514 nm長通，6 ms曝光時間

從許多其他應(yīng)用中獲益

我們的光片模塊不僅僅是共聚焦顯微鏡的一個附加功能模塊,。 STELLARIS與DLS相輔相成,，為您的研究擴(kuò)大了選擇范圍。 例如,，您可以使用共聚焦技術(shù)操控樣本,，然后使用DLS成像。

只需在LAS X軟件中切換共聚焦模式和光片模式,，即可輕松實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn),。 這樣，光轉(zhuǎn)換或劃痕實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)的長時間溫和觀察都將變得容易和方便,。

熟悉的樣本制備

DLS采用垂直實(shí)驗(yàn)設(shè)置,，因此您可以繼續(xù)采用自己熟悉的樣本制備方式。 樣本裝在傳統(tǒng)的玻璃底有蓋培養(yǎng)皿中,，可直接操作,。 您甚至還可以在多位置實(shí)驗(yàn)中篩選多個樣本。 利用共聚焦電動載物臺可在一個實(shí)驗(yàn)設(shè)置中對多個樣本成像,。 **的先決條件是什么,？ 樣本每側(cè)需要留出放置TwinFlect反光鏡的空間。

DLS的樣本制備,。 樣本嵌入玻璃底培養(yǎng)皿的瓊脂中,。 必須去除多余的瓊脂，以便為TwinFlect反光鏡騰出空間,。

附加樣本處理工具

使用U形玻璃毛細(xì)管進(jìn)行樣本裝載

U形玻璃毛細(xì)管有兩種尺寸,。 因此它們可與不同的TwinFlect反光鏡搭配使用，并可用作放置樣本的匹配支架,。

其他信息

使用旋轉(zhuǎn)裝置來裝載DLS樣本

FEP管折射率為1.338,，通常用于裝載浸入水溶液的樣本。 為了以**方式對齊樣本以便成像,，專門設(shè)計了一個旋轉(zhuǎn)裝置來調(diào)節(jié)視角,。

其他信息

使用安裝支架進(jìn)行樣本制備

此處顯示的徠卡安裝框架為進(jìn)行DLS成像所需的樣本制備提供了一項(xiàng)重要優(yōu)勢： 能夠制備更多數(shù)量的樣本,，可與BABB（苯甲醇苯甲酸芐酯）等潛在有害試劑一起使用。

其他信息

安裝框架套件（24 x 50毫米矩形樣本支架 + 直徑為30毫米的圓形樣本支架）

光片與共聚焦技術(shù)結(jié)合的優(yōu)勢

由于無縫集成DLS,，您的光片成像可以受益于STELLARIS系統(tǒng)的技術(shù)創(chuàng)新,。

始終使用合適的激光

STELLARIS共聚焦顯微鏡的所有可見激光均可用于光片成像。 使用可選的固定譜線激光器和STELLARIS新一代光激光,，可以非常靈活地為光片實(shí)驗(yàn)選擇合適的染料,。 使用STELLARIS 8，您現(xiàn)在甚至可以實(shí)現(xiàn)近紅外染料的成像,。

始終使用合適的掃描器

在配備 雙掃描器的STELLARIS系統(tǒng)中,，您可以 在共振快速掃描頭或 高分辨掃描頭（1400Hz）之間進(jìn)行選擇，以便生成掃描的光片,。 使用共振快速掃描頭生成光片時像素停留時間更短,，有利于更溫和地成像。

以工作流程為導(dǎo)向的軟件設(shè)計

LAS X軟件可逐步指導(dǎo)用戶完成數(shù)據(jù)記錄和評估,。以工作流程為導(dǎo)向的設(shè)計可幫助您更高效地使用儀器,。 便捷的校準(zhǔn)程序可精確確定光片。

設(shè)計中采用雙側(cè)照亮樣本方法：兩塊TwinFlect反光鏡相對放置,，均可被掃描器瞄準(zhǔn)，從而消除陰暗區(qū)域,。 要在較大視場中獲得清晰圖像,，可以使用LAS X軟件中LightSheet Wizard的在線或離線融合選項(xiàng)合并這兩張圖像。

您可根據(jù)自己的需求通過LAS X定制該軟件,。 LAS X 3D Visualization模塊以直觀裁剪,、快速渲染和立體顯示等新方法交互處理三維數(shù)據(jù)。 區(qū)塊掃描實(shí)驗(yàn)可使您觀察大面積區(qū)域,。 “標(biāo)記和查找”實(shí)驗(yàn)可使您在多位置的設(shè)置中觀察多個感興趣的區(qū)域,。

優(yōu)質(zhì)光學(xué)元件

適合廣泛應(yīng)用領(lǐng)域的優(yōu)質(zhì)物鏡是 徠卡顯微系統(tǒng)的標(biāo)志性特征之一。 垂直轉(zhuǎn)動光片的系統(tǒng)核心由 物鏡和 TwinFlect 反光鏡裝置構(gòu)成,。

您可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求,，通過選擇不同的照明物鏡來形成光片。

要呈現(xiàn)*微小的細(xì)節(jié),、獲得更大的視場 或匹配成像介質(zhì)的折射率,，您可以從越來越多的選件中挑選**的檢測物鏡。

方便的數(shù)據(jù)處理

以三維方式長時間觀察過程會生成大量數(shù)據(jù),。 LAS X軟件中集成了多種工具,，有助您方便地管理這些數(shù)據(jù)。 在線融合工具讓您既可以選擇保留原始數(shù)據(jù),， 也可以只保存合并后的圖像以節(jié)省磁盤空間,。 您的數(shù)據(jù)會在采集過程中自動存儲,。 智能加載功能可以讓您方便地查看數(shù)據(jù)，直接訪問大型延時數(shù)據(jù)集中感興趣的時間點(diǎn)或Z軸,。 您可以編譯所需的后期處理步驟,，使其在一個自動流程中完成。

理想的環(huán)境條件

軟件控制的氣候室可保持*適宜樣本的環(huán)境條件,。 用戶可使用LAS X環(huán)境控制模塊全面控制實(shí)驗(yàn)條件,。 在實(shí)驗(yàn)過程中可監(jiān)測所記錄的環(huán)境數(shù)據(jù)。 您可在一個界面中設(shè)置所有環(huán)境條件,，例如可以運(yùn)行熱休克實(shí)驗(yàn)的溫度曲線,。

在大孵育箱或小孵育箱解決方案之間進(jìn)行選擇。