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動物細胞破碎技術(shù)和高速膠體磨的解決辦法 ,,細胞破碎技術(shù),,多糖提取 ,組織勻漿
細胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,,使細胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù),,是分離純化細胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)(產(chǎn)品)的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進展,,以前認為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn),。
由于細菌、酵母,、真菌,、植物都有細胞壁,但成分不同,,且同類細胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不同,,因此其細胞壁的堅固程度不同,總體呈現(xiàn)遞增態(tài)勢,。
動物細胞雖沒有細胞壁,,但具有細胞膜,也需要一定的細胞破碎方法來破膜,,達到提取產(chǎn)物的目的,。
細胞破碎的方法主要分為化學法和機械法兩大類。具體如下:
化學法
滲透沖擊破碎法
? 方法:滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),,由于滲透壓的作用,細胞內(nèi)水分便向外滲出,,細胞發(fā)生收縮,,當達到平衡后,將介質(zhì)快速稀釋,,或?qū)⒓毎D(zhuǎn)入水或緩沖液中,,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內(nèi),,引起細胞快速膨脹而破裂,。
反復(fù)凍融法
? 方法:將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,,反覆多次而達到破壁作用,。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,,從而增加細胞的親水性能,,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂,。對于細胞壁較脆弱的菌體,,可采用此法。
酶溶破碎發(fā)法
? 方法:利用各種水解酶,,如溶菌酶,、纖維素酶、蝸牛酶,、半纖維素酶,、脂酶等,將細胞壁分解,,使細胞內(nèi)含物釋放出來,。有些細菌對溶菌酶不敏感,加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,,使之轉(zhuǎn)為對溶菌酶敏感而溶解,。
? 特點:
a) 此法適用多種微生物
b) 具有作用條件溫和
c) 內(nèi)含物成分不易受到破壞
d) 細胞壁損壞的程度可以控制
? 存在的問題:
a) 易造成產(chǎn)物抑制作用
b) 溶酶價格高
c) 酶溶法通用性差
化學試劑法
? 方法:某些有機溶劑(如苯、甲苯),、抗生素,、表面活性劑、金屬螯合劑,、變性劑等化學藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)含物有選擇地滲透出來,。SDS(十二烷基磺酸鈉)是典型的陰離子表面活性劑
? 特點:提取核酸時,,常用此法破碎細胞,。
? 存在的問題:
a) 時間長,效率低;
b) 化學試劑毒性較強,,同時對產(chǎn)物也有毒害作用
通用性差:某種試劑只能作用于某些特定類型的微生物細胞,。
方法 | 技術(shù) | 原理 | 效果 | 成本 | 應(yīng)用 |
化學法 | 滲透沖擊 | 滲透壓破壞細胞 | 溫和 | 便宜 | 動物組織均質(zhì)物或細胞懸液 |
酶消化法 | 細胞壁被消化,使細胞破碎 | 溫和 | 昂貴 | 細菌或酵母 | |
增溶法 | 表面活性劑溶解細胞壁 | 溫和 | 適中 | 動物或植物組織均質(zhì)物,,提取DNA | |
脂溶法 | 有機溶劑溶解細胞壁并使之失穩(wěn) | 適中 | 便宜 | 動物或植物組織均質(zhì)物,,提取DNA | |
堿處理法 | 堿的皂化作用使細胞壁融解 | 劇烈 | 便宜 | 菌液質(zhì)粒DNA提取,RNA提取 |
一般企業(yè)是多破碎,,先物理破壁,,然后化學凍融來組合破壁提高收率
由于 動物 一般是 分級破碎,
目前市場上大多數(shù)的膠體磨廠家生產(chǎn)出來的膠體磨轉(zhuǎn)速只能達到3000rpm左右,,當然我所說的都是指工業(yè)化的膠體磨機,。對于實驗室小型膠體磨機,由于電機(220V),,軸等因素轉(zhuǎn)速可達30000rpm左右,,但是這種實驗室膠體磨無法對應(yīng)放大到生產(chǎn)中,,所以在這里不做重點講訴。
3000轉(zhuǎn)膠體磨的結(jié)構(gòu)大都都是直連電機,,膠體磨機的主軸和電機直連,,電機就決定了主軸的轉(zhuǎn)速。而進口膠體磨采用分體式結(jié)構(gòu),,通過皮帶進行變速,,XX設(shè)備由于結(jié)構(gòu)的設(shè)計缺失、機械密封技術(shù)的不足的原因,,以及改進后成本大幅度的提高問題,,一直無法實現(xiàn)高速膠體磨機的自主研發(fā)和生產(chǎn)。
當用我們的設(shè)備好處是什么,?效果好(研磨效果,、均質(zhì)效果、分散效果,、乳化效果……),,速度快,效率高,。每一臺設(shè)備都具有多功能改裝,,根據(jù)不同的要求更換不同的模塊。還有什么,?,??那就是能耗低,,據(jù)用過依肯的設(shè)備客戶反應(yīng),,就電費就能省下不少。如何去選擇一臺合適的設(shè)備,,一定會做一個明智的選擇,!
在線式高速膠體磨優(yōu)點
1 CMS2000系列作為一個用于混合分散粉碎工藝的設(shè)備,其具有連續(xù)式性操作,因此也被稱作連續(xù)式超高速粉碎機,能夠更好滿足大批量連續(xù)化生產(chǎn)作業(yè)要求.
1分散乳化粉碎效率高:批次乳化機在進行乳化前往往需要預(yù)攪拌,在其基礎(chǔ)上才能實現(xiàn)較好的分散乳化混合效果.因此所需要時間更多,產(chǎn)量更小.適用于不連續(xù)生產(chǎn)或者產(chǎn)量較小的生產(chǎn).而連續(xù)式膠體磨機可以直接進行投料,更短時間能夠?qū)崿F(xiàn)混合分散的顆粒經(jīng)的要求.產(chǎn)量大效率高,適用于連續(xù)式生產(chǎn),產(chǎn)量更大的情況.
2分散效粉碎果好:其他粉碎設(shè)備在罐體內(nèi),物料與粉碎頭較松散,,工作時依靠強大的吸力使物料進入分散頭中,,不能實現(xiàn)足夠小的顆粒經(jīng)要求。而連續(xù)式乳化機由于乳化腔體內(nèi)部設(shè)計足夠小,,膠體磨頭與物料緊密接觸,,剪切充分,同時膠體磨腔體設(shè)計成多層轉(zhuǎn)定子咬合結(jié)構(gòu),,優(yōu)化粗齒結(jié)構(gòu),,可以滿足混合乳化粉碎的顆粒經(jīng)分布較窄,效率更高
3 技術(shù)功能指標更高:CMS2000系列管線膠體磨機比較在相同的馬達情況下,,轉(zhuǎn)速有明顯優(yōu)勢,,CMS2000轉(zhuǎn)速可以達到14000RPM,,可以在更短的惡時間內(nèi)處理更多符合要求的物料,能夠為大批量生產(chǎn)的企業(yè)實現(xiàn)生產(chǎn)過程的成本降低,。
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