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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測(cè)花鯧中水解氨基酸

Biochrom30+氨基酸分析儀檢測(cè)花鯧中水解氨基酸
麥奇克/Microtrac  2021-01-19  |  閱讀:1544

 


 

摘要:

以花鯧為原料,,使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)其肌肉的氨基酸組成進(jìn)行分析,。結(jié)果表明花鯧肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為14443.578mg/100g,,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的39.59%,鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.73%,。

 

 

  1. 樣品前處理

  2. 所用試劑

    1. 濃鹽酸,,濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

    2. 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

    3. 水:去離子水

    4. 苯酚:須重蒸

    5. 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

行號(hào)

氨基酸

行號(hào)

氨基酸

1

Asp       

天冬氨酸

2

Thr

蘇氨酸

3

Ser       

絲氨酸

4

Glu

谷氨酸

5

Pro       

脯氨酸

6

Gly

甘氨酸

7

Ala       

丙氨酸

8

Cys

胱氨酸

9

Val       

纈氨酸

10

Met

蛋氨酸

11

Ile        

異亮氨酸

12

Leu

亮氨酸

13

Tyr

酪氨酸

14

Phe       

苯丙氨酸

15

His

組氨酸

16

Lys

賴(lài)氨酸

17

Arg

精氨酸




 

  1. 前處理設(shè)備

  2. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g,。

  3. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL

  4. 勻漿機(jī),。

  5. 無(wú)油真空泵

  6. 干浴水解濃縮儀

  7. 移液管

  8. 0.22um濾膜

     

  9. 樣品制備(參考國(guó)標(biāo)GB 5009.124-2016

    原料魚(yú)手工去除魚(yú)鱗、魚(yú)皮,、魚(yú)刺和內(nèi)臟,,采肉后清洗、瀝干,,在勻漿機(jī)中打成肉糜,,于-18℃冰箱中冷凍保存,分析時(shí)取出解凍后使用,。

     

  10. 試樣水解

    稱(chēng)取含蛋白7.5-25mg的試樣,,加入水解管中,加入15mL 6mol/L鹽酸,,繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴~4滴,。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中,,110°C水解22-24h,,冷卻、混勻,、開(kāi)管,、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取適量樣液,,在干浴水解濃縮儀中50°C吹干,,必要時(shí)加入少許水,重復(fù)吹干1-2次,,加入3-5mL PH2.2的稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過(guò)0.22μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶,為樣品測(cè)定液,供儀器測(cè)定用,。

     

  11. 分析方法描述(Biochrom 30+

    氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

  12. 色譜柱:Biochrom Na型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱,4.620cm

  13. 分離程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


2

00:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON


5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON


6

01:00

52

5

35.0ml/h

ON

ON


7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON


8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON


9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON


10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF


11

02:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


End








 

  1. 運(yùn)行時(shí)間:經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 57min

  2. 反應(yīng)單元溫度:135°C,。

  3. 檢測(cè)波長(zhǎng):570nm,、440nm同時(shí)檢測(cè)。

     

     

  4. 樣品中氨基酸含量的計(jì)算

       樣品測(cè)定液氨基酸的含量按式(2)計(jì)算:

    ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

    式中:

    ci ———樣品測(cè)定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    Ai ———試樣測(cè)定液氨基酸i的峰面積;

    As ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

    cs ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL),。

     

    試樣中各氨基酸的含量按式(3)計(jì)算:

    Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

    式中:

    Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

    ci ———試樣測(cè)定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    F ———稀釋倍數(shù);

    V ———試樣水解液轉(zhuǎn)移定容的體積,單位為毫升(mL);

    M ———氨基酸i的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol);

    m ———稱(chēng)樣量,單位為克(g);

    109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數(shù);

    100 ———換算系數(shù),。

     

     

     

     

     

附、花鯧分析圖譜及做樣結(jié)果

 


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