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Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測魚料中氨基酸

Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測魚料中氨基酸
麥奇克/Microtrac  2020-05-13  |  閱讀:1578

一、樣品前處理


1,、所用試劑

1、1  濃鹽酸,,優(yōu)級純

1、2  6mol/L 鹽酸:濃鹽酸與水1:1混合

1,、3  水:去離子水

1,、4  苯酚:須重蒸

1、5  19種氨基酸標準品


2,、標樣配置

  •  氨基酸混合標準儲備液:含有天冬氨酸,、蘇氨酸等17種常見組成蛋白質(zhì)的氨基酸。

  •    ?;撬針藴蕛湟海河肞H2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

  •    正亮氨酸標準儲備液:用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

  •    璜基丙氨酸標準儲備液:用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

  • 蛋氨酸砜標準儲備液:用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

  • 羥脯氨酸標準儲備液:用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

  • 鳥氨酸標準儲備液:用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用,。

將17種氨基酸混合標準儲備液,、牛磺酸,、正亮氨酸,、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜,、羥脯氨酸,、鳥氨酸及PH2.2的檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的標準品待用。


3、前處理設(shè)備

1)     天平    

2)     水解管    

3)     量筒    

4)     無油真空泵    

5)     干浴水解,、濃縮儀    

6)     移液管    

7)     0.45um濾膜    


4,、樣品制備(參考歐盟飼料指令98/64/EC )


1、樣品的準備

粉碎樣品,,通過0.5mm的篩孔,。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油(3.12)脫脂,。

2,、氧化

從準備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品,準確到0.2mg,,于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中,,稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮,水分不能超過100mg,。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃,,加5ml氧化試劑(過甲酸苯酚),用帶彎頭的玻璃刮勺混合,。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封,,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小時,。之后,,從冰箱中取出,加0.84克偏重亞硫酸鈉(3.4)來分解過量的氧化試劑,。

3,、水解

 加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中,溫度控制在110攝氏度,,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),,水解1小時。然后快速旋緊瓶塞(戴手套和護眼罩)將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時,。

4,、加入內(nèi)標并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

當水解反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)瓶從烘箱中取出,,并且打開瓶口(戴手套和護目鏡),。冷卻后用定量加樣器準確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標準溶液,混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中,。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20,。轉(zhuǎn)移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有蓋子的塑料瓶中??梢择R上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定,。


二,、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

1)  色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6X20cm

2)  分離程序:

3)     運行時間:分析時間65min

4)     反應(yīng)單元溫度:135°C,。

5)     檢測波長:570nm,、440nm同時檢測。


附,、魚料分析圖譜及做樣結(jié)果


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