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圖1,。集群藻類(lèi)(微囊藻)和絲狀藻類(lèi)(Anabaena)可以使用FlowCam及其分析軟件VisualSpreadsheet^?枚舉。每張圖片下方標(biāo)注菌落面積(ABD) (μm²),。

樣品采集與制備

以下節(jié)選自Lehman et al.(2017),，《2014年嚴(yán)重干旱對(duì)舊金山河口微囊藻爆發(fā)的影響》，《有害藻類(lèi)63:94-1208》,，描述了他們樣品的收集和制備,。

用Lugol溶液保存所要測(cè)定生物體積的微囊藻的兩個(gè)樣品(>75 μm粒徑)。微囊菌落的生物體積是使用FlowCam數(shù)字成像流式細(xì)胞儀(Fluid imaging Technologies,；Sieracki et al.,，1998)檢測(cè)獲得Area (ABD)。為了更方便地測(cè)量集群藻的生物體積,，將樣品分成直徑<300 μm的餾分,，并在10倍和4倍放大下檢測(cè)。>300μm樣品在2倍放大下分析,?；贔lowCam測(cè)量的細(xì)胞豐度結(jié)果與顯微分析的結(jié)果密切相關(guān)(r=0.88,p<0.01)。

采用0.3m深度的全水(未處理)樣品,，測(cè)定了次地表水中浮游植物和藍(lán)藻的生物體積和分類(lèi)組成(>10 μm粒徑分?jǐn)?shù)),。這些樣本保存在4℃，并在FlowCam數(shù)字成像流式細(xì)胞儀上保存1到3小時(shí),。FlowCam安裝了一個(gè)熒光觸發(fā)器,，可以從碎屑中分離活的浮游植物(Sieracki et al.，1998),。將樣品置于100 mL在10分鐘內(nèi)通過(guò)流通池中,，采用10倍放大1，以此獲得細(xì)胞的數(shù)字圖像,。

計(jì)算細(xì)胞密度：集群藻類(lèi)

Lehman等人使用以下方法計(jì)算了含有集群微囊藻樣品的細(xì)胞密度(細(xì)胞/mL),。

首先,，測(cè)定微囊藻菌落中單個(gè)細(xì)胞的平均面積。從VisualSpreadsheet列表文件中選擇集群(圖2),，用VisualSpreadsheet計(jì)算菌落的面積(Area, ABD)除以圖像中人工計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)(圖2),。

圖2。微囊藻集群在VisualSpreadsheet軟件中顯示的圖像,。圖下標(biāo)注了每個(gè)集群的面積(ABD) (μm²),。下面的計(jì)算中使用了綠色突出顯示的菌落圖像。人工計(jì)數(shù)顯示,，每個(gè)高亮集群從左到右分別有4,、6、13和28個(gè)微囊細(xì)胞,。

在列表(LST)文件中分離出微囊藻后,，將該文件導(dǎo)出至Excel，作為分類(lèi)總結(jié)報(bào)告,。在Excel單元格中輸入以下公式,，計(jì)算樣本的平均細(xì)胞密度:

計(jì)算細(xì)胞密度：絲狀藻類(lèi)

計(jì)算集群藻細(xì)胞密度的方法也可用于計(jì)算絲狀藍(lán)藻(包括魚(yú)腥藻的細(xì)胞密度。

為了確定單個(gè)細(xì)胞的面積(ABD),，將魚(yú)腥藻絲的面積(ABD)除以圖像中細(xì)胞的數(shù)量,。

利用VisualSpreadsheet文件中的圖像(圖3)，確定Anabaena細(xì)胞的平均面積(ABD)為48 μm²,。

在VisualSpreadsheet列表(LST)文件中篩分出魚(yú)腥藻之后,，數(shù)據(jù)被導(dǎo)出到Excel中，作為分類(lèi)總結(jié)報(bào)告,。將如下公式輸入到Excel細(xì)胞中,，計(jì)算絲狀藻樣本的細(xì)胞密度:

細(xì)胞豐度被用來(lái)追蹤藻華生長(zhǎng),。使用上述方法，F(xiàn)lowCam可以用來(lái)計(jì)算集群或絲狀藍(lán)藻藻華的細(xì)胞豐度,。