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介紹

蛋白質(zhì)被用在很多領(lǐng)域,，比如食物，制藥學(xué),、生物化學(xué),、生物學(xué),，而且經(jīng)常是比較高的濃度。醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)榱怂幬镞m合長(zhǎng)期服用或減少注射次數(shù),，蛋白濃度通常較高，這時(shí)科學(xué)儀器表征方法很大程度上受到高度濃縮的蛋白質(zhì)分散性的挑戰(zhàn),。高濃度蛋白質(zhì)懸浮液出現(xiàn)不穩(wěn)定性的影響因素有溫度,，鹽濃度和氨基酸加量等。蛋白質(zhì)的變性程度經(jīng)常用粘度來(lái)表征,，如蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致粘度增加,。DLS或zeta電位也是常用方法，缺點(diǎn)是需要稀釋,，可能改變分散狀態(tài),。

在這篇文章中，我們使用Turbiscan監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)的聚集過(guò)程中的平均直徑變化,。多重光散射技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是可以在不稀釋狀態(tài)下,，分析它們的自然形態(tài)變化過(guò)程。

材料&方法

實(shí)驗(yàn)溫度60℃,，濃度為10wt%牛血清白蛋白(BSA)分散在水中,，加入不同濃度的氨基酸組氨酸(3 ~ 20nm)，用Turbiscan Tower多重光散射儀進(jìn)行測(cè)量,。

結(jié)果與討論

溫度升高導(dǎo)致蛋白質(zhì)尺寸增加，改變相互作用,，使溶液從透明變得渾濁,，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。組氨酸和氨基酸常用于防止蛋白質(zhì)變性,。室溫下濃度為10%wt 的BSA蛋白溶液是透明的,。組氨酸加量較少的樣品，在60°C從透明到不透明發(fā)生變質(zhì),，如Figure 1所示,。

Figure 2為非稀釋狀態(tài)下BSA蛋白粒徑隨時(shí)間變化曲線，F(xiàn)igure 3為不同組氨酸加量的蛋白在20h的粒徑對(duì)比圖,。

可以看出組氨酸對(duì)BSA蛋白的變性（粒徑增加）有明顯的抑.制作用,。

結(jié)論

基于靜態(tài)多重光散射的turbiscan技術(shù)可以用來(lái)蛋白質(zhì)變性過(guò)程，濃度范圍介于0.0001和95%之間,，粒徑范圍適用于10nm和1000μm之間,，這種方法的優(yōu)點(diǎn)是可以在不稀釋狀態(tài)下，原位測(cè)量樣品的粒徑變化過(guò)程和不穩(wěn)定現(xiàn)象,。

Formulaction

穩(wěn)定性分析儀Turbiscan AGS

專為大批量研發(fā)部門和質(zhì)檢部門設(shè)計(jì),。Turbiscan Lab 與全自動(dòng)機(jī)械手的wanmei結(jié)合,。全自動(dòng)機(jī)械手包括3個(gè)獨(dú)立的恒溫槽和一個(gè)樣品輸送的機(jī)械臂。每個(gè)恒溫槽中有18個(gè)樣品槽,，一共可以存儲(chǔ)54個(gè)樣品依次測(cè)量,。恒溫槽溫度控制從室溫+5℃到60℃，樣品輸送的機(jī)械臂每小時(shí)運(yùn)行60次,，可連續(xù)7天不間斷工作。