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背景：佐劑是基于重組蛋白的現(xiàn)代疫苗的關(guān)鍵組成部分，這些疫苗通常免疫原性很差,，沒有其他免疫刺激劑,。水包油乳劑包含一類高級的疫苗佐劑，它們是批準(zhǔn)的季節(jié)性和大流行性流感疫苗的組成部分,。但是，很少有報(bào)道系統(tǒng)地評估不同乳液組分的體外穩(wěn)定性和體內(nèi)佐劑作用,。

目標(biāo)：為了評估不同均質(zhì)次數(shù)下,，粒徑的分布情況,，均質(zhì)三次是否可以滿足要求。

方法：通過高壓微射流均質(zhì)機(jī)制備乳液,，并通過動態(tài)光散射，電鏡測試相關(guān)的結(jié)果,。

結(jié)果：我們證明了均質(zhì)三次,，結(jié)果已經(jīng)達(dá)到了預(yù)期，但是仍然有明顯的大顆粒的存在,。

結(jié)論：通過微射流均質(zhì)機(jī)可以制備質(zhì)量較好的疫苗佐劑,，水包油乳劑可以顯著增強(qiáng)針對大流行性流感抗原的抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng),。

關(guān)鍵詞：微射流均質(zhì)機(jī)；納米粒度儀,；水包油乳劑,；大流行性流感,；疫苗佐劑;

1 疫苗佐劑綜述

疫苗接種的目的就是要獲得對疾病持久的免疫保護(hù)反應(yīng),。 與弱毒疫苗不同,，滅活疫苗或亞單位疫苗通需要疫苗佐劑的參與才能更好的發(fā)揮作用,?！白魟币淮蝸碜杂诶≌Z“ Adjuvare ”一詞,，為“幫助”或“輔助”之意,。免疫佐劑的生物作用包括：

1 抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后,，改變了抗原的物理性狀,，可使抗原物質(zhì)緩慢地釋放,，延長了抗原的作用時(shí)間；

2 佐劑吸附了抗原后,，增加了抗原的表面積,，使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬；

3 佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對抗原的處理,；

4 可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原,；

5 佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞之間的接觸,，增強(qiáng)輔助 T 細(xì)胞的作用

6 可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變,；

7 改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并使其增強(qiáng),。

人們正是因?yàn)橛^察到疫苗接種位點(diǎn)處形成的膿腫協(xié)助機(jī)體產(chǎn)生了針對特異性抗原更強(qiáng)的免疫反應(yīng),， 從而形成了疫苗佐劑的理念。與接種抗原不相關(guān)的物質(zhì)形成的膿腫壞死也能增強(qiáng)疫苗的特異性免疫反應(yīng),。

油乳劑佐劑繼鋁鹽類佐劑后用于人用疫苗佐劑，包括水包油或油包水乳劑,，如，弗氏不完全佐劑,， Montanide系列,，佐劑 65。通過在接種位點(diǎn)形成抗原貯存庫降低抗原的釋放速度,， 以及刺激產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞發(fā)揮佐劑效應(yīng),。

油乳劑的副作用主要包括在接種位點(diǎn)處形成炎癥反應(yīng)，肉芽腫以及潰瘍,。為了篩選出更穩(wěn)定,，毒性更小的油乳劑，已經(jīng)對不同來源的多種天然油進(jìn)行了評估,。水包油和油包水疫苗佐劑是繼弗氏不完全佐劑發(fā)展起來的油乳佐劑,，更加穩(wěn)定，毒副作用也更小,。

2 材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備：

中試型高壓微射流均質(zhì)機(jī)（PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī),，意大利PSI均質(zhì)機(jī)公司）,，配備75微米（E102D，G10Z）孔徑“Y型”通道金剛石交互容腔（均質(zhì)腔）,。納米粒度及Zeta電位儀（Z3000納米粒度及Zeta電位儀,，美國PSS公司）。

2 實(shí)驗(yàn)材料：

聚山梨酯80,，泊洛沙姆188,，甘油，緩沖液,，山梨糖醇三油酸酯,，卵磷脂酰膽堿，α-生育酚,。

3 實(shí)驗(yàn)步驟：

通過水相和油相分開制備來制備所有乳液制劑,。在攪拌下將聚山梨酯80，泊洛沙姆188,，甘油和緩沖液組分溶解在水相中,，而將山梨糖醇三油酸酯，卵磷脂酰膽堿和α-生育酚在超聲處理和加熱下溶解在油相中,。然后Silverson實(shí)驗(yàn)型混合機(jī)乳化劑將水相和油相以1000 g混合10分鐘（得到粗乳液,。通過PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)將粗乳液在207 MPa（30000 psi）下均質(zhì)3遍（圖示一），水浴溫度設(shè)置為室溫,，測試粒徑變化情況,。 

圖示一：A).本實(shí)驗(yàn)所用PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)圖片。B).金剛石交互容腔內(nèi)部概覽圖,，孔徑為75微米,。C).交互容腔內(nèi)部剖面圖，剪切率約為2×106/秒,。

3 試驗(yàn)結(jié)果

使用Z3000納米粒度儀分別測試均質(zhì)3次的粒徑變化,，均質(zhì)次的粒度為：163.9nm、150.5nm,、135.8nm,，結(jié)果如下（圖示二）。

圖示二  A：均質(zhì)第一次的粒徑結(jié)果,，B均質(zhì)第二次的粒徑結(jié)果,，C均質(zhì)第二次的粒徑結(jié)果，D均質(zhì)三次結(jié)果對比,，E電鏡結(jié)果

從結(jié)果中可以看出均質(zhì)三次后粒徑發(fā)生了很大的變化,，從電鏡結(jié)果中可以看出，均質(zhì)三次的樣品有明顯的大顆粒的存在,，所以均質(zhì)三次還是不夠的,，通常情況下仍要增加均質(zhì)次數(shù)來達(dá)到更好的粒徑結(jié)果,，查詢相關(guān)的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，不同的乳化劑對于粒徑的影響很大,，較好的配方能夠在減少的均質(zhì)次數(shù)的情況下獲得更小更好的粒徑分布,，并且存儲時(shí)間更長，這些還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去論證,。

4 結(jié)論

通過PSI-20微射流均質(zhì)機(jī)可以在較短的時(shí)間內(nèi)制備出較好的疫苗佐劑,，粒徑結(jié)果較好。水包油型流感抗原佐劑能有效地增加免疫廣度,，降低所需抗原劑量,。為了充分發(fā)揮這些佐劑在各種環(huán)境下的潛力，穩(wěn)定性和替代成分可能更便宜或更容易獲得是重要的考慮因素,。在實(shí)驗(yàn)中得到的顆粒大小結(jié)果也是一個很好的參考意義,，這對于發(fā)展中國家有很好的指導(dǎo)作用。PSI和PSS可以很好的滿足這一實(shí)驗(yàn)的測量,。