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美國(guó)PSS粒度儀,、意大利PSI均質(zhì)機(jī)
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使用意大利PSI微射流均質(zhì)機(jī)制備疫苗佐劑

使用意大利PSI微射流均質(zhì)機(jī)制備疫苗佐劑
上海奧法美嘉生物科技有限公司  2024-02-20  |  閱讀:1828

全文共 1815 字,,閱讀大約需要6分鐘


背景:佐劑是基于重組蛋白的現(xiàn)代疫苗的關(guān)鍵組成部分,,這些疫苗通常免疫原性很差,沒有其他免疫刺激劑,。水包油乳劑包含一類高級(jí)的疫苗佐劑,,它們是批準(zhǔn)的季節(jié)性和大流行性流感疫苗的組成部分。但是,,很少有報(bào)道系統(tǒng)地評(píng)估不同乳液組分的體外穩(wěn)定性和體內(nèi)佐劑作用,。

目標(biāo):為了評(píng)估不同均質(zhì)次數(shù)下,粒徑的分布情況,,均質(zhì)三次是否可以滿足要求,。

方法:通過(guò)高壓微射流均質(zhì)機(jī)制備乳液,并通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射,,電鏡測(cè)試相關(guān)的結(jié)果,。

結(jié)果:我們證明了均質(zhì)三次,結(jié)果已經(jīng)達(dá)到了預(yù)期,,但是仍然有明顯的大顆粒的存在,。

結(jié)論:通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)可以制備質(zhì)量較好的疫苗佐劑,水包油乳劑可以顯著增強(qiáng)針對(duì)大流行性流感抗原的抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng),。


關(guān)鍵詞:微射流均質(zhì)機(jī),;納米粒度儀;水包油乳劑,;大流行性流感,;疫苗佐劑;


1 疫苗佐劑綜述

疫苗接種的目的就是要獲得對(duì)疾病持久的免疫保護(hù)反應(yīng)。 與弱毒疫苗不同,,滅活疫苗或亞單位疫苗通需要疫苗佐劑的參與才能更好的發(fā)揮作用,。“佐劑”一次來(lái)自于拉丁語(yǔ)“ Adjuvare ”一詞,,為“幫助”或“輔助”之意,。免疫佐劑的生物作用包括:

1 抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后,,改變了抗原的物理性狀,可使抗原物質(zhì)緩慢地釋放,,延長(zhǎng)了抗原的作用時(shí)間,;

2 佐劑吸附了抗原后,增加了抗原的表面積,,使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬,;

3 佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的處理;

4 可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體,。故免疫佐劑的作用可使無(wú)免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原,;

5 佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞之間的接觸,增強(qiáng)輔助 T 細(xì)胞的作用

6 可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變,;

7 改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),并使其增強(qiáng),。


人們正是因?yàn)橛^察到疫苗接種位點(diǎn)處形成的膿腫協(xié)助機(jī)體產(chǎn)生了針對(duì)特異性抗原更強(qiáng)的免疫反應(yīng),, 從而形成了疫苗佐劑的理念。與接種抗原不相關(guān)的物質(zhì)形成的膿腫壞死也能增強(qiáng)疫苗的特異性免疫反應(yīng),。


油乳劑佐劑繼鋁鹽類佐劑后用于人用疫苗佐劑,,包括水包油或油包水乳劑,如,,弗氏不完全佐劑,, Montanide系列,佐劑 65,。通過(guò)在接種位點(diǎn)形成抗原貯存庫(kù)降低抗原的釋放速度,, 以及刺激產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞發(fā)揮佐劑效應(yīng)。


油乳劑的副作用主要包括在接種位點(diǎn)處形成炎癥反應(yīng),,肉芽腫以及潰瘍,。為了篩選出更穩(wěn)定,毒性更小的油乳劑,,已經(jīng)對(duì)不同來(lái)源的多種天然油進(jìn)行了評(píng)估,。水包油和油包水疫苗佐劑是繼弗氏不完全佐劑發(fā)展起來(lái)的油乳佐劑,更加穩(wěn)定,,毒副作用也更小,。


2 材料與方法

實(shí)驗(yàn)設(shè)備:

中試型高壓微射流均質(zhì)機(jī)(PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī),意大利PSI均質(zhì)機(jī)公司),,配備75微米(E102D,,G10Z)孔徑“Y型”通道金剛石交互容腔(均質(zhì)腔)。納米粒度及Zeta電位儀(Z3000納米粒度及Zeta電位儀,,美國(guó)PSS公司),。


2 實(shí)驗(yàn)材料:

聚山梨酯80,,泊洛沙姆188,甘油,,緩沖液,,山梨糖醇三油酸酯,卵磷脂酰膽堿,,α-生育酚,。


3 實(shí)驗(yàn)步驟:

通過(guò)水相和油相分開制備來(lái)制備所有乳液制劑。在攪拌下將聚山梨酯80,,泊洛沙姆188,,甘油和緩沖液組分溶解在水相中,而將山梨糖醇三油酸酯,,卵磷脂酰膽堿和α-生育酚在超聲處理和加熱下溶解在油相中,。然后Silverson實(shí)驗(yàn)型混合機(jī)乳化劑將水相和油相以1000 g混合10分鐘(得到粗乳液。通過(guò)PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)將粗乳液在207 MPa(30000 psi)下均質(zhì)3遍(圖示一),,水浴溫度設(shè)置為室溫,,測(cè)試粒徑變化情況。 


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圖示一:A).本實(shí)驗(yàn)所用PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)圖片,。B).金剛石交互容腔內(nèi)部概覽圖,,孔徑為75微米。C).交互容腔內(nèi)部剖面圖,,剪切率約為2×106/秒,。


3 試驗(yàn)結(jié)果

使用Z3000納米粒度儀分別測(cè)試均質(zhì)3次的粒徑變化,均質(zhì)次的粒度為:163.9nm,、150.5nm,、135.8nm,結(jié)果如下(圖示二),。


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圖示二  A:均質(zhì)第一次的粒徑結(jié)果,,B均質(zhì)第二次的粒徑結(jié)果,C均質(zhì)第二次的粒徑結(jié)果,,D均質(zhì)三次結(jié)果對(duì)比,,E電鏡結(jié)果


從結(jié)果中可以看出均質(zhì)三次后粒徑發(fā)生了很大的變化,從電鏡結(jié)果中可以看出,,均質(zhì)三次的樣品有明顯的大顆粒的存在,,所以均質(zhì)三次還是不夠的,通常情況下仍要增加均質(zhì)次數(shù)來(lái)達(dá)到更好的粒徑結(jié)果,,查詢相關(guān)的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),,不同的乳化劑對(duì)于粒徑的影響很大,較好的配方能夠在減少的均質(zhì)次數(shù)的情況下獲得更小更好的粒徑分布,并且存儲(chǔ)時(shí)間更長(zhǎng),,這些還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去論證,。


4 結(jié)論

通過(guò)PSI-20微射流均質(zhì)機(jī)可以在較短的時(shí)間內(nèi)制備出較好的疫苗佐劑,粒徑結(jié)果較好,。水包油型流感抗原佐劑能有效地增加免疫廣度,,降低所需抗原劑量。為了充分發(fā)揮這些佐劑在各種環(huán)境下的潛力,,穩(wěn)定性和替代成分可能更便宜或更容易獲得是重要的考慮因素,。在實(shí)驗(yàn)中得到的顆粒大小結(jié)果也是一個(gè)很好的參考意義,這對(duì)于發(fā)展中國(guó)家有很好的指導(dǎo)作用,。PSI和PSS可以很好的滿足這一實(shí)驗(yàn)的測(cè)量,。

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