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微量化的P450代謝檢測(cè)

微量化的P450代謝檢測(cè)
貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)  2024-08-23  |  閱讀:840

藥物代謝實(shí)驗(yàn)中,,細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450 Proteins, CYP)檢測(cè)是最常用的實(shí)驗(yàn)之一,,了解P450的代謝情況,可以幫助了解藥物在細(xì)胞以及動(dòng)物體內(nèi)的代謝情況,,是藥物開(kāi)發(fā)中常用的實(shí)驗(yàn)方法,。


傳統(tǒng)的檢測(cè)方法反應(yīng)體積大,,步驟多,很難進(jìn)行快速高效的實(shí)驗(yàn),,現(xiàn)在我們可以使用Echo納升移液的方法,,將化合物體積縮小100倍,試劑體積減小5倍,,檢測(cè)板可以使用384或者1536孔板進(jìn)行,,來(lái)提高整個(gè)實(shí)驗(yàn)的效率和質(zhì)量。


下圖是利用P450-Glo? Screening Systems試劑盒,,進(jìn)行發(fā)光法的P450檢測(cè)結(jié)果,,實(shí)驗(yàn)中


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  • 化合物使用50nL

  • Luciferin檢測(cè)試劑5uL

  • 酶和底物以及NADPH試劑4.95uL

  • 用酶標(biāo)儀檢測(cè)

  • 利用Echo直接稀釋獲得24點(diǎn)的濃度反應(yīng)曲線


另外還可以進(jìn)行小體積的MS檢測(cè),如下圖,,左側(cè)為實(shí)驗(yàn)流程以及反應(yīng)體積,,右側(cè)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果:


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使用Echo聲波納升移液可以為我們帶來(lái):


  • 精準(zhǔn)的移液質(zhì)量

  • 快速的移液過(guò)程

  • 減少100倍的化合物體積

  • 更少的實(shí)驗(yàn)步驟

  • 容易實(shí)現(xiàn)的聯(lián)合用藥檢測(cè)

  • 無(wú)耗材的實(shí)驗(yàn)方法


以上實(shí)驗(yàn)可以看出, Echo聲波納升移液的特性將實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體積減小到10-20uL,,可以在384孔板或1536孔板進(jìn)行,,復(fù)雜的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)以及多達(dá)24個(gè)點(diǎn)的IC50實(shí)驗(yàn)都可以依賴于Echo的智能軟件輕松完成,大大提高ADME的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,。


 ● 參考文獻(xiàn):

 Jing Wang , Labcyte Inc.High-throughput Miniaturization of Cytochrome P450 Time-dependent Inhibition Screening Using the Echo? 525 Liquid Handler

Jean Shieh1, Tracy Worzella2, and Aoife Gallagher3 , Miniaturized Luminescent Metabolism Profiling Assays

TRACY WORZELLA, M.S.1, JAMES CALI, PH.D.1, AND NEAL COSBY, PH.D.1, JEAN SHIEH, X.X.2, AOIFE GALLAGHER, X.X.3, GERLINDE ZERZASCHNITZHOFER, X.X.4, AND KIM TITUS, X.X.5, 1PROMEGA CORPORATION, 2LABCYTE CORPORATION, 3DEERAC FLUIDICS, 4TECAN AG CORPORATION, 5CORNING INC. BIOLUMINESCENCE FOR DRUG METABOLISM PROFILING

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