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高效提純新冠病毒,，貝克曼離心機(jī)是如何做到的,？

貝克曼庫爾特生命科學(xué) 2020-05-26 | 閱讀：9203

貝克曼離心機(jī)—您實(shí)驗(yàn)室中的病毒分離專家

高效分離純化病毒樣品是病毒學(xué)研究以及抗病毒藥物篩選,、疫苗研制的基礎(chǔ),。自19世紀(jì)60年代以來,，貝克曼超速離心機(jī)一直致力于病毒分離研究,，已成功幫助科學(xué)家分離得到幾乎所有病毒種類。作為當(dāng)之無愧的病毒分離專家,，貝克曼Optima X系列超速離心機(jī)以其安全可靠,、操作方便的卓越性能贏得了科學(xué)家的青睞，成為病毒分離的最佳之選,。

新冠肺炎疫情以來,，新病例迅速增加，在世界范圍內(nèi)引起大規(guī)模爆發(fā),，并導(dǎo)致了相當(dāng)高的發(fā)病率和死亡率,?？茖W(xué)家已鑒定其病原體為SARS-CoV-2，2020年3月11日,，WHO將COVID-19列為大流行病,。在病毒研究與藥物篩選、疫苗研發(fā)中新冠病毒的分離純化是必不可少的重要步驟,，利用超速離心技術(shù)高效分離病毒的方法已被國內(nèi)外專家廣泛認(rèn)可,，成為病毒分離的主要方法。

超速離心機(jī)分離病毒

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院與北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染構(gòu)建了SARS-CoV-2 S蛋白假病毒系統(tǒng),，證明人類ACE2（血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2）是SARE-CoV-2病毒的功能受體，同時他們對SARS-CoV-2的易感細(xì)胞系,、病毒受體,、侵入途徑等進(jìn)行了研究，揭示了病毒侵入人體細(xì)胞的具體過程,，這一研究已發(fā)表在《Nature Communication》雜志,。

在研究中，為了檢測假病毒系統(tǒng)SARS-CoV-2 S蛋白的表達(dá),，他們首先需要將假病毒顆粒從細(xì)胞裂解后的上清液中分離出來,。在分離過程中，他們使用Beckman超速離心機(jī),，將病毒上清加入SW41水平轉(zhuǎn)子的離心管中,，并在離心管底部加入20%的蔗糖墊液，然后在4℃環(huán)境下以25,000rpm的轉(zhuǎn)速離心2h,。離心完畢后棄去上清,，留下管底沉淀，并用30 μl緩沖液重懸,，得到SARS-CoV-2假病毒樣品用于后續(xù)檢測,。

在超速離心分離病毒時，為了保持病毒顆粒的完整性與病毒形態(tài),，經(jīng)常使用墊液沉淀,，例如在管底加入20%的蔗糖墊液，使顆粒到達(dá)管底時減速沉降,，最大程度保持病毒顆?；钚耘c完整度。

超速離心機(jī)助力新冠病毒提取

武漢病毒研究所的石正麗研究員在2013年發(fā)表于國際頂尖雜志《Nature》的一篇研究中提到,，他們從蝙蝠糞便樣品中分離到一株活體的SL-CoV冠狀病毒,。在進(jìn)行毒株提取與分離時，石正麗研究團(tuán)隊(duì)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液后,，使用Beckman超速離心機(jī)Type 90 Ti定角轉(zhuǎn)頭,，加入20%的蔗糖墊液80,000×g離心90分鐘,，對收集到的病毒顆粒進(jìn)行分離與濃縮。PBS重懸后染色,，進(jìn)行透射電鏡的觀察,。

分離SARS-Cov-2假病毒樣品

在新華醫(yī)院與杭州BaylorOracle公司合作對于SARS-Cov-2的抗病毒藥物篩選研究中，他們通過體外構(gòu)建SARS-Cov-2假病毒,，研究發(fā)現(xiàn)吲哚美辛（indomethacin）是一種有效的SARS-Cov-2抑制劑,。在分離SARS-Cov-2假病毒樣品時，他們同樣使用20%蔗糖墊液,，50,000×g超速離心90分鐘后,，用PBS重懸得到病毒樣品，并用于細(xì)胞感染,。

更高純度病毒樣本提取

在病毒研究中,，當(dāng)使用電鏡等方法觀察病毒形態(tài)時，對病毒顆粒的純度要求較高,，僅使用差速離心法,，如前文介紹的蔗糖墊超速離心，并不得到高純度的病毒樣品,。因此通常使用密度梯度離心與蔗糖墊超速離心結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法來獲得滿足要求的高純度,、高濃度的病毒顆粒。

加拿大公共衛(wèi)生局的研究人員在使用冷凍電子顯微鏡研究SARS-CoV冠狀病毒與ACE2結(jié)合時的構(gòu)象變化時,，詳細(xì)描述了他們?nèi)绾问褂肂eckman的超速離心機(jī)進(jìn)行病毒分離純化的,。收集上清后，他們首先使用Beckman SW32水平轉(zhuǎn)頭28,000rpm離心90分鐘,，PBS重懸后得到SARS-CoV病毒樣品粗提產(chǎn)物,。然后將病毒樣品置于12-30%的碘克沙醇梯度液中，使用SW40轉(zhuǎn)頭,，38,000 rpm離心2.5小時,，然后收集高純度的病毒樣品用于電鏡檢測。

總而言之,，貝克曼作為離心技術(shù)領(lǐng)域的專家,，使用貝克曼超速離心機(jī)分離純化病毒已得到科學(xué)家的廣泛認(rèn)可，具有龐大的用戶群體與文獻(xiàn)支持,，是您進(jìn)行病毒研究的可靠選擇,。

為了幫助研究人員高效分離病毒毒株與假病毒，病毒分離專家貝克曼庫爾特推出病毒純化專用的超離配置方案,，致力于幫助客戶解決病毒分離難題,。

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自1947年第一臺商用超速離心機(jī)發(fā)明以來,，貝克曼庫爾特離心技術(shù)已有70多年的歷史,。早在19世紀(jì)60年代，已有許多用戶使用貝克曼離心機(jī)成功分離了多種病毒顆粒,。截至現(xiàn)在,，貝克曼超離已幫助客戶分離純化得到流感病毒、肝炎病毒,、腺病毒,、慢病毒等多種幾乎覆蓋所有類型的病毒樣品。貝克曼龐大的用戶群體已為研究人員儲存發(fā)表了數(shù)以萬計的病毒分離方法與文獻(xiàn),，助力病毒研究的同時,，也使貝克曼離心機(jī)成為了當(dāng)之無愧的病毒分離專家。