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本文摘要

在本文及其所涉及的完整版白皮書中,，介紹了NanoSigh Pro開發(fā)的細胞外囊泡（EVs）的熒光標記和檢測方法，以及指導(dǎo)這些方法實施的代表性數(shù)據(jù),。

通過光散射和熒光分析評估細胞外囊泡大小分布和濃度,。采用多種熒光染料和熒光基團，不僅正式了EVs的存在,，而且還有效地檢測了其表面和內(nèi)部RNA貨物上的四次跨膜蛋白生物標志物,。

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細胞外囊泡（EVs）因其不斷發(fā)展的應(yīng)用和突破而引起了人們越來越大的探索興趣,，特別是在疾病診斷和治療潛力領(lǐng)域,。這些由活生物體內(nèi)的細胞產(chǎn)生的物質(zhì)最初被認為是細胞廢物。然而,，研究揭示了它們在細胞通訊中的關(guān)鍵作用,。例如EVs的組成，可以反映其來源細胞的生理或病理狀態(tài),，使之成為一些列疾病的生物標志物,，從癌癥到神經(jīng)退行性疾病和炎癥性疾病。

準確表征EVs制劑的大小,、異質(zhì)性和濃度可分析,、了解生物功能和診斷提供重要信息。但從體液中提取的細胞外囊泡伴隨著非EVs成分,，形成了相當多樣化的異質(zhì)的系統(tǒng),，這對分析表征提出了重大挑戰(zhàn)。

由于EVs的復(fù)雜性,，通常采用多種技術(shù)方法來全面表征EVs,，包括流式細胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡,、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）,、質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學、基于顯微鏡的方法和納米顆粒跟蹤分析（NTA）,。

NTA已成為快速表征細胞外囊泡高分辨率大小和濃度的常用技術(shù),。

NTA光學裝置示意圖

在本文涉及的研究報告中，使用來自尿液的EVs，通過光散射和熒光分析評估其大小分布和濃度,。采用多種熒光染料和熒光基團,，通過直接標記抗體進行生物標志物檢測，使用NanoSight Pro對樣品進行納米顆粒跟蹤分析,，對每次熒光測量應(yīng)用適當?shù)募す獠ㄩL和熒光長通濾光片,，在NS Xplorer軟件的專屬熒光模式下，可在單次測量中對光散射和熒光進行組合分析,，不僅報告尺寸分布,，還直接報告濃度和熒光效率。

本白皮書闡述了如何使用NanoSight Pro探索各種標記方法,，遵循染料特性（例如光穩(wěn)定性和亮度）,、樣品制備方法（例如抗體親和力和特異性、孵育條件）和測量條件（例如樣品呈現(xiàn),、儀器設(shè)置,、測量時間）等一些簡單的規(guī)則，來實現(xiàn)熒光NTA檢測EVs亞群,，從而揭示細胞外囊泡EVs的不同特性,。