編號(hào)：NMJS06250
篇名：納米孔技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)的研究新突破
作者：張獻(xiàn)[1]
關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)研究 信號(hào)檢測(cè) BSA 固態(tài)納米孔
機(jī)構(gòu)： [1]廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西南寧530000
摘要： 目的探討納米孔技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)的研究新突破,。方法應(yīng)用氮化硅材料納米孔芯片,，初步研究金納米棒及BSA易位行為，建立應(yīng)用納米孔檢測(cè)納米顆粒樣品及蛋白質(zhì)生物分子樣品方法,，統(tǒng)計(jì)分析納米顆粒的易位信號(hào)及蛋白質(zhì)分子信號(hào);按照實(shí)驗(yàn)所獲得的易位信號(hào),，總結(jié)常見的易位信號(hào)類型;按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果模擬固態(tài)納米孔內(nèi)電場(chǎng)及納米孔周圍電場(chǎng),，獲得不同電壓下同一納米孔的電場(chǎng)強(qiáng)度比較。結(jié)果實(shí)驗(yàn)選擇孔徑為78nm的固態(tài)納米孔檢測(cè)蛋白質(zhì)BSA,，將溶于1MKC1溶液內(nèi)的樣品,，加人至流體內(nèi)，偏置電壓變換獲得BSA分子過孔信號(hào)圖,；選擇76nm的納米孔在980mV,、900mV、400mV電壓下檢測(cè)12nm的蛋白質(zhì)BSA分析易位結(jié)果,，易位事件的原始信號(hào)如圖2曰400mV電壓下納米孔與蛋白質(zhì)的相互作用較強(qiáng),，易位事件相對(duì)較為分散,，而980mV及900mV電壓下，納米孔與蛋白質(zhì)分子的作用時(shí)間較短,，分子過孔速度較快,，出現(xiàn)的易位事件也較多;激發(fā)波長(zhǎng)為280nm時(shí)，BSA在自然折疊態(tài)時(shí)內(nèi)源熒光發(fā)射峰的最大發(fā)射波長(zhǎng)位于346nm附近,，說明色氨酸殘基部分被隱藏,；隨著尿素濃度的升高，BSA的相對(duì)熒光強(qiáng)度逐漸下降,，出現(xiàn)熒光猝滅現(xiàn)象,，說明BSA及尿素發(fā)生作用，導(dǎo)致BSA變性,，但在0?5M時(shí),，蛋白質(zhì)出現(xiàn)部分變性，6M后,，峰值出現(xiàn)顯著紅移,，BSA完全變性;蛋白質(zhì)BSA和經(jīng)尿素變性后的BSA易位原始信號(hào)圖：BSA加人后,，電流基線較波動(dòng),，后出現(xiàn)易位信號(hào)，蛋白質(zhì)易位時(shí)間的長(zhǎng)短,，與BSA與孔的作用及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)密切相關(guān);加人經(jīng)尿素變性的BSA后,，電流基線總體穩(wěn)定但變細(xì)，易位信號(hào)峰頂端較尖,。結(jié)論氮化硅納米孔檢測(cè)蛋白質(zhì)應(yīng)用為后續(xù)的納米孔傳感器在蛋白質(zhì)研究中提供理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),。
