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樣品的大量制備在時間、資源和未知性潛在問題方面需要花費的的成本很高,。這就是為什么在進行規(guī)模實驗之前進行小試分析,，例如選擇合適的固定相和流動相，以此來實現(xiàn)效益最大化,。對于那些需要進行制備型HPLC的用戶來講,，在較小規(guī)模上篩選純化參數(shù)的完美方式是采用分析型HPLC。今天,，“小步”同學(xué)講向您展示為什么這種技術(shù)是有利的,，以及是如何實現(xiàn)分析型HPLC與制備型HPLC的轉(zhuǎn)化。

在之前的文章中“小步”同學(xué)向大家描述了如何使用薄層色譜 (TLC) 來篩選合適的分離條件,。在那篇文章當(dāng)中,，TLC 可以被視為小試實驗。

但是,，如果您計劃使用制備型 HPLC 進行大規(guī)模純化，那么分析色譜則會等效于 TLC,，成為您進行下一步的有效工具,。

分析色譜有助于選擇流動相和固定相，同時節(jié)省時間,、成本并減少大規(guī)模制備過程中可能發(fā)生的潛在意外因素,。這是實驗者喜歡這種方式的一個很好的原因。

是的,，分析型 HPLC 需要全自動設(shè)備，而且設(shè)備成本較昂貴,。但與 TLC 相比，分析色譜可以使用梯度進行,，這對用戶非常有益,。C18 反相色譜柱可以幫助提高過程的成本效益。這是因為 C18 固定相在用有機溶劑洗滌后可以重復(fù)使用,，以去除強保留的雜質(zhì)等,。相反，Silica正相色譜柱在洗脫之后不能重復(fù)使用,。

當(dāng)您編輯分析色譜方法過程時,，您應(yīng)該根據(jù)制造商的建議選擇樣品濃度和流速。通常情況下,，建議載樣量為 1-10mg,，流速則為 0.1-10ml/min。

分析色譜的目的是在最短的時間內(nèi)以最大的負(fù)載量實現(xiàn)目標(biāo)化合物與其余雜質(zhì)等基線分離。

一旦您對分析結(jié)果感到滿意,，您可以考慮直接運用制備型 HPLC 進行大量制備了,。用戶喜歡分析色譜的另外一個原因是，可以借助一些公式直接將分析色譜的方法轉(zhuǎn)移到制備色譜上,。

最簡單的方法是保持分析柱填料的粒徑,、長度與制備柱相同。如果您能做到這一點,，您可以使用以下公式來確定載樣量（體積或濃度）,、流速和直徑：

載樣A = 載樣B x（直徑A/直徑B）2 x（長度A/長度B）

流速A = 流速B x（直徑A/直徑B）2

其中：A 代表制備柱當(dāng)量；B 代表分析柱當(dāng)量

除此之外,，您依然可以使用相同的梯度方法（溶劑和時間的比率）,。

并且，“小步”同學(xué)還建議您從小一些的制備型 HPLC 色譜柱開始,，如果需要的話,，在之后的實驗中再升級到更大的尺寸。

希望這篇文章可以幫助您成功完成制備型 HPLC 的樣品純化,，從而避免更多的時間與資源的浪費,！

好了，今天“小步”同學(xué)就介紹到這里,，我們下期再見,！