本文參考國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布的《GB 5009.17-2014 食品中甲基汞的測定》，通過HPLC-ICPMS聯(lián)用,，采用C18柱，利用等度洗脫的方式對稀酸浸提后的大米進(jìn)行了分析，同時對樣品采取了加標(biāo)處理,，且加標(biāo)回收率良好。測試結(jié)果表明,，該方法能夠快速準(zhǔn)確地進(jìn)行大米樣品中汞形態(tài)的分析,。

1.儀器簡介

本方法采用Skyray Instrument LC-310E與ICP-MS 2000E聯(lián)用，采用一鍵式數(shù)據(jù)采集,、精準(zhǔn)式譜圖定位及強大的軟件譜圖處理功能,，可滿足不同的形態(tài)測試需求（如圖1）,。

圖1.HPLC-ICPMS聯(lián)用測汞形態(tài)的分析儀

2.測試原理

樣品溶液經(jīng)過前處理，由HPLC進(jìn)樣口進(jìn)樣,，經(jīng)色譜柱分離,，通過霧化器霧化后送入高溫等離子體中，干燥,、原子化,、電離，元素離子經(jīng)接口室進(jìn)入質(zhì)譜儀,，通過離子透鏡系統(tǒng),、質(zhì)量分析器及檢測器，檢測器對相應(yīng)元素離子做出響應(yīng)（每秒離子計數(shù)cps（counts per second）,，經(jīng)軟件處理,，響應(yīng)強度和時間組成的峰面積與相應(yīng)組分離子濃度成正比關(guān)系進(jìn)行定性定量分析。

3.實驗部分

3.1實驗設(shè)備及試劑

液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀（江蘇天瑞儀器股份有限公司）,；

電子天平（BSA224S,，賽多利斯）；

色譜柱（Ultimate  XB-C18,，4.6×150mm,，5μm）；

超純水系統(tǒng)（Millipore,，電阻率為18.25MΩ·cm）,；

鹽酸（優(yōu)級純，Scharlau）,；

氨水（優(yōu)級純,，上海晶純試劑有限公司）；

乙酸銨（優(yōu)級純,，阿拉丁化學(xué)試劑）,；

L－半胱氨酸（生物純，阿拉丁化學(xué)試劑）,；

甲醇（色譜純,，Oceanpak 色譜純試劑）；

汞形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)溶液（水中汞GBW（E）083186,、甲基汞GBW（E）083364,、乙基汞GBW（E）081524，中國計量科學(xué)院）,；

超聲波（KH-500E,昆山禾創(chuàng)）,；

雙功能水浴恒溫振蕩器（SHA-B,江蘇國華）；

高速離心機（TG16G,凱特）,。

3.2樣品前處理

稱取大米樣品1.0g（精確至0.001g）,，置于15mL的離心管中,，加入10mL的鹽酸溶液（5mol/L）靜置過夜。后經(jīng)常溫水浴振蕩60min,，于4℃下以8000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心15min,。取上層清液2mL至5mL的容量瓶中，用稀氨水調(diào)節(jié)PH到7.0,，再加入0.1mL的L－半胱氨酸（10g/L）,，最后用超純水定容至刻度并搖勻。用0.45μm的有機系濾膜過濾后,，待測,。

3.3流動相及汞形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1流動相的配制

60mmol/L乙酸銨＋0.1%L-半胱氨酸＋5%甲醇：稱取4.627g乙酸銨，1.21gL-半胱氨酸于100mL容量瓶中,，加入少量的超純水并于電熱板上加熱使其完全溶解,，冷卻后定容至100mL。將定容好的溶液移入1000mL的淋洗液瓶中,，同時加入50mL的甲醇,，定容至1L。經(jīng)0.45μm的有機系濾膜過濾后,，于超聲波超聲脫氣30min,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

3.3.2汞形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)溶液：

三種汞標(biāo)準(zhǔn)溶液采用淋洗液按照梯度濃度的方式依次被稀釋為1.0μg/L,、2.0.μg/L、4.0μg/L,、8.0μg/L,、10.0μg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時配制5μg/L三種汞形態(tài)的單標(biāo)溶液,，用來判別每種汞形態(tài)的出峰時間,。

3.4實驗條件

3.4.1色譜條件

     色譜條件詳見表1。

表1. HPLC分析條件

3.4.2質(zhì)譜條件

     ICP-MS分析條件見表2,。

表2.ICP-MS分析條件

3.5實驗結(jié)果

3.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度1.0μg/L、2.0.μg/L,、4.0μg/L,、8.0μg/L、10.0μg/L 進(jìn)樣得到色譜圖,，計算其峰面積,，以濃度和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，結(jié)果詳見圖2-1~2-3,。

圖2-1.Hg2+標(biāo)準(zhǔn)曲線 

圖2-2.MetHg標(biāo)準(zhǔn)

圖2-3.EtHg標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.5.2色譜分離圖

1.0μg/L,、2.0.μg/L、4.0μg/L,、8.0μg/L,、10.0μg/L 汞形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分離色圖譜如圖3所示，其中無機汞（Hg2+）,、甲基汞（MetHg）,、乙基汞（EtHg)相對保留時間分別為118s、185s,、379s,，從譜圖疊加圖上可以看出，三種汞形態(tài)出峰時間穩(wěn)定,，且分離度較好,。

圖3. 汞形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分離圖譜

      3.5.3 檢出限

          如圖4所示為1.0μg/L汞形態(tài)混和標(biāo)準(zhǔn)溶液分離圖譜，以各形態(tài)峰附近基線處的3倍信噪比（S/N)峰高對應(yīng)的濃度作為檢出限,，溶液中Hg2+,、MetHg、EtHg分別為0.112μg/L,、0.0718μg/L,、0.0698μg/L。

圖4. 1.0μg/L汞形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜

3.5.4 測試結(jié)果

以大米樣品為試樣,，進(jìn)行稀酸浸提,，同時為了考察方法的準(zhǔn)確性，并對大米試樣采取了加標(biāo)的方式,，測試結(jié)果詳見表3,。

表3   大米樣品及樣品加標(biāo)結(jié)果

圖5. 大米樣品及樣品加標(biāo)5.0μg/L圖譜

4. 結(jié)論

本文建立了LC-ICPMS測試大米中汞形態(tài)的分析方法，結(jié)果表明該方法檢出限低,、測試結(jié)果準(zhǔn)確,，其加標(biāo)回收率在90%~112%之間，線性相關(guān)系數(shù)均在0.999以上,；同時汞的三種形態(tài)能夠在8min左右完成,，且分離度較好，該方法可滿足食品中大米樣品汞形態(tài)分析的要求,。