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① 細胞克隆性檢測的意義
細胞克隆性檢測是指通過檢測細胞群體中是否存在單克隆性增殖,，來判斷是否存在腫瘤或其他克隆性疾病的診斷方法,。克隆性檢測在疾病診療中具有重要意義,，尤其是在血液系統(tǒng)腫瘤,、實體瘤和免疫相關疾病的診斷、治療和預后評估中發(fā)揮著關鍵作用,。例如,，在淋巴造血系統(tǒng)疾病中,，克隆性檢測可以區(qū)分反應性增殖（如感染引起的免疫細胞增生）和惡性克隆性疾病（如淋巴瘤和白血?。?。此外，在自身免疫病中,，克隆性檢測可用于評估異常T/B細胞的擴增情況,，有助于鑒別疾病類型。
② 克隆性檢測方法
目前,，細胞克隆性檢測的主要方法包括基因重排分析（IGH/TCR重排檢測）,、免疫電泳、熒光原位雜交 (FISH) ,、單細胞測序和流式細胞術等,。
基因重排分析
利用PCR擴增免疫球蛋白重鏈 (IGH) 或T細胞受體 (TCR) 基因的可變區(qū)，檢測克隆性擴增,。
優(yōu)點：靈敏度高,，可用于低豐度克隆檢測；適用于T/B細胞克隆性分析,。
缺點：無法提供細胞形態(tài)或表型信息,；需要特定的引物設計以及高質(zhì)量DNA，可能受樣本降解影響,。
免疫電泳
通過電泳分離血清中的免疫球蛋白,，檢測是否存在單克隆性免疫球蛋白。
優(yōu)點：可以快速,、高效地對多種蛋白同時進行檢測,，適用于多發(fā)性骨髓瘤等疾病的診斷。
缺點：靈敏度相對較低,，且不能直接檢測細胞克隆性,。
熒光原位雜交
利用熒光探針檢測細胞核中特定基因或染色體異常（如BCL2、MYC重排）,。
優(yōu)點：特異性高,，可直接觀察染色體異常，適用于惡性克隆性腫瘤,。
缺點：檢測通量有限,；對某些克隆擴增的敏感性不足。
流式細胞術
相比上述方法檢測細胞克隆性,，流式細胞儀檢測的最大優(yōu)勢在于,，可以同時檢測多個標記物，提供更全面的免疫表型信息，通過不同抗原對異常細胞進行設門再精確分析異常細胞的克隆性,，特異性更高,，適用于淋巴瘤、白血病的克隆性鑒定,。
③ 流式如何實現(xiàn)細胞克隆性檢測
在B細胞和T細胞淋巴細胞的成熟過程中,，抗原受體基因——免疫球蛋白 (IGH) 和T細胞受體 (TCR) 通過在可變 (V) 和連接 (J) 區(qū)域，或者在多樣性 (D) 區(qū)域發(fā)生基因重排,，從而產(chǎn)生了適應性免疫反應的不同抗原結合部分,，因此造就了淋巴細胞抗原特異性受體的廣泛多樣性，也是免疫系統(tǒng)應對多種病原體的基礎,。
體細胞基因重排組成TCR示意圖
據(jù)估計,，IGH基因或TCR基因可發(fā)生超過200萬次重排。兩個正常淋巴細胞發(fā)生相同重排的可能性可以忽略不計,，但是惡性淋巴細胞來源于單個腫瘤細胞,，往往表現(xiàn)出相同的IGH或TCR基因重排。因此通過流式細胞術進行細胞IGH或TCR是否存在限制性,，便可用于檢測淋巴瘤等疾病的細胞單克隆性,。
TCR是T細胞表面的特征性標志，根據(jù)TCR組成鏈的不同,，可將T細胞分為αβ T細胞和γδ T細胞,，其中αβ T細胞約占T細胞的95%~99%，γδ T細胞約占1%~5%,。由于αβ T細胞占T細胞的絕大多數(shù)且重排率更高,，目前流式主要通過對αβ T細胞的TCR的克隆分布檢測來評估T細胞克隆性，主要有兩種方案：TCR-Vβ受體庫檢測以及TRBC1/TRBC2檢測,。
TCR-Vβ受體庫檢測
通過檢測TCR β鏈可變區(qū) (TCR-Vβ) 受體的多樣性來進行克隆性檢測,。正常T細胞TCR-Vβ抗原為多克隆，腫瘤細胞表現(xiàn)為單個克隆的優(yōu)勢增生,。貝克曼庫爾特生命科學公司提供的TCR-Vβ受體庫試劑盒（貨號：IM3497）包含了8組24個TCR-Vβ抗體,，適合于所有流式細胞儀檢測。
檢測結果圖例
正常T細胞TCR-Vβ抗原分布
單克隆性T細胞的異常表達
由于TCR-Vβ受體的種類比較多,，該受體庫試劑盒的抗體種類僅覆蓋70%左右的T細胞克隆,，如果TCR-Vβ家族總和過低，可能提示存在試劑盒無法覆蓋的TCR-Vβ克隆性,，也可作為單克隆性的證據(jù),。
TRBC1/TRBC2檢測
與TCR-Vβ受體庫檢測的是TCR β鏈的可變區(qū)不同，TRBC1/2檢測的是TCR β鏈恒定區(qū)結構域的抗體,。在TCR基因重排過程中,，T細胞受體的β亞基恒定區(qū) (TRBC) 僅有兩種多態(tài)性，即TRBC1或TRBC2，每個TCR以隨機和互斥的方式不可逆地選擇兩個恒定區(qū)域中的一個進行表達,，類似于B細胞κ和λ，為多克隆表達,。當某一TRBC群體的表達比例大于85%或小于15%時,，則提示單克隆性表達。
檢測結果圖例
健康人外周血流式細胞術結果顯示,，總T細胞,、CD4+（青色）和CD8+（橙色）T細胞上存在多型TRBC表達
單克隆T細胞表達TRBC限制性圖例
相比TCR-Vβ受體庫復雜的操作，TRBC1/2檢測是更簡單高效的選擇,。目前,，貝克曼庫爾特生命科學公司也全新推出了TRBC1/2的檢測試劑，感興趣的小伙伴歡迎垂詢或訂購,！如需要了解更多信息,，請與貝克曼庫爾特公司的業(yè)務代表聯(lián)系！
參考文獻
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