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為什么CytoFLEX SRT分選能夠達(dá)到這么高的純度與得率,？儀器這么小的體積，分選細(xì)胞的得率卻比以前的‘大塊頭’明顯高很多,，我感覺以前分選準(zhǔn)備那么多細(xì)胞好浪費(fèi),。

這是許多體驗(yàn)過CytoFLEX SRT的用戶的共同疑問。今天,，讓我們揭開CytoFLEX SRT卓越分選性能背后的秘密,，了解它如何通過雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算實(shí)現(xiàn)分選純度和得率的全面提升。

分選液滴延遲（Drop Charge Delay,，DCD）的重要性

在細(xì)胞分選過程中,，分選液滴延遲（drop charge delay，DCD）有時也被簡寫為（drop delay,，DD）,，是指從被檢測顆粒通過激光檢測點(diǎn)，到形成分選液滴斷裂點(diǎn)（break off point,，BOP）并施加電荷之間的時間延遲,，這一時間延遲通常以“cycle（周期）”為單位表示。這是因?yàn)橐旱蔚男纬墒怯煞诌x振蕩頻率與振幅共同決定,，液滴形成的過程被分為若干周期或循環(huán)（cycle）,。在BOP處，液滴開始與液流斷開,，帶著相應(yīng)的電荷，經(jīng)過電場偏轉(zhuǎn)進(jìn)入收集管中,。DCD的準(zhǔn)確性對于確保目標(biāo)顆粒被正確地偏轉(zhuǎn)到收集容器中至關(guān)重要,。若DCD設(shè)置不準(zhǔn)確,，目標(biāo)顆粒可能會被錯誤地分類為廢液,，導(dǎo)致分選回收率和純度下降,。

Rmax全面的分選質(zhì)控

Rmax（maximum expected recovery）是一種用于評估細(xì)胞分選儀性能的系統(tǒng)方法，通過計(jì)算樣本在未分選部分中損失的目標(biāo)細(xì)胞百分比,，來確定分選回收率的最大值,。與僅依賴純度的評估方法相比，Rmax提供了更全面的分選性能評估,，特別是在分選效率和回收率至關(guān)重要時,。

一般的分選后質(zhì)控，會將分選細(xì)胞進(jìn)行簡單的回測,，檢測純度,，但實(shí)際上會忽略掉分選得率。分選得率相較于分選純度,，更容易受分選液滴延遲的影響,。

傳統(tǒng)技術(shù)的局限

傳統(tǒng)的分選液滴延遲只是機(jī)械地使用微球進(jìn)行簡單估算，估計(jì)出大致的DCD分布區(qū)間,，最終確認(rèn)可能的最優(yōu)值,。但是由于分選過程涉及細(xì)胞在不同域中的流體動力學(xué)表現(xiàn)，從流動室內(nèi)到接近噴嘴,，再到噴嘴通過,，這些都會影響DCD的準(zhǔn)確性。

在流動室內(nèi),，鞘液形成的流體動力學(xué)聚焦過程中,，細(xì)胞距離中心軸的位置不同，其流體速度也不同,?？拷室毫鞯募?xì)胞加速較慢，而位于中心軸的細(xì)胞加速較快,。通過噴嘴后,，由于動量守恒，速度方程又會變化,。

因此,，有些儀器雖然能夠通過微球自動估算出DCD的值，但卻與Rmax的最優(yōu)解存在較大誤差,。例如,，Rmax方法獲得的最優(yōu)DCD，得率可以達(dá)到90%,，但自動計(jì)算獲得的DCD雖然對純度沒有影響,，卻導(dǎo)致得率下降,。

創(chuàng)新的雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算方法

CytoFLEX SRT采用了一種創(chuàng)新的雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算方法，結(jié)合了時間域測量和空間域分析,，確保了計(jì)算的精確性和可靠性,。

時間域測量（DD1） 

首先，CytoFLEX SRT通過測量QC微球從激光觸發(fā)點(diǎn)到專用激光點(diǎn)的行進(jìn)時間來計(jì)算DD1,。QC微球是標(biāo)準(zhǔn)化的校準(zhǔn)顆粒,，能夠提供一致且可重復(fù)的測量結(jié)果。這一步驟確保了初始測量的高精度和可靠性,。

空間域分析計(jì)算（DD2）

接下來,，CytoFLEX SRT基于高精度圖像分析，通過高速攝像技術(shù)捕捉液體射流在BOP處的斷裂和形成液滴的過程,。通過分析這些圖像,，能夠精確計(jì)算從QC微球經(jīng)過專用激光點(diǎn)到BOP的剩余時間。高精度圖像分析能夠捕捉到微小的時間變化和液體射流的動態(tài)變化,，確保了更高的時間測量精度,。

雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算的優(yōu)勢

1 提高分選精度和回收率

通過雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算，CytoFLEX SRT確保分選儀在最佳條件下運(yùn)行,，從而大幅提高了分選的回收率和精度,。準(zhǔn)確的DCD設(shè)置，使得目標(biāo)顆粒能夠被更有效地偏轉(zhuǎn)到收集容器中,，減少了樣品浪費(fèi),。

2 實(shí)時監(jiān)控和調(diào)整

圖像分析提供了實(shí)時反饋，允許在分選過程中動態(tài)調(diào)整DCD,。即使在樣品條件變化或儀器狀態(tài)波動時,，也能確保分選儀始終在最佳狀態(tài)下運(yùn)行，進(jìn)一步減少誤差,。

3 減少實(shí)驗(yàn)誤差

自動化的雙域精準(zhǔn)方法減少了環(huán)境與樣本等因素的干擾,，通過標(biāo)準(zhǔn)化的操作步驟和自動化計(jì)算，保證了測量結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性,。

結(jié)語

通過采用創(chuàng)新的雙域精準(zhǔn)DCD計(jì)算方法,，CytoFLEX SRT不僅在分選純度和得率方面取得了顯著突破，還實(shí)現(xiàn)了分選過程的自動化與智能化,，讓流式分選變得竟然如此簡單,。2024年CytoFLEX家族迎來十周年，我們持續(xù)為科研人員提供更加高效和可靠的工具,。未來,，我們期待更多用戶能夠體驗(yàn)到CytoFLEX SRT帶來的卓越性能和便利，加速科研前沿的探索。

參考資料

1.PEREZ‐GONZALEZ, Alexis, et al. Evaluation of Sort Recovery via Rmax. Current Protocols, 2024, 4.2: e986.

2."Method and apparatus for compensating for variations in particle trajectories in electrostatic sorter for flowcell cytometer" (控制液滴可控充電并與載運(yùn)流體斷開的時間點(diǎn)的的方法以及細(xì)胞儀系統(tǒng)) -專利編號: CN101675334B,, 專利持有人: 貝克曼庫爾特公司 (Beckman Coulter, Inc.)

3."Flow Cytometer Sorter" - 專利編號: US8889072B2, 專利持有人: Beckman Coulter, Inc.