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超全,！宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的法規(guī)要求和檢測(cè)方法寶典來了,！

貝克曼庫爾特生命科學(xué) 2024-05-30 | 閱讀：2510

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）的法規(guī)要求對(duì)于確保生物制藥產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性至關(guān)重要,。經(jīng)測(cè)試,，殘留的HCP可能引起不良反應(yīng)，如免疫反應(yīng),，也需要關(guān)注到的是殘留的HCP可能影響藥物的活性,，導(dǎo)致藥物效果降低，影響治療效果,。這些負(fù)面影響會(huì)直接導(dǎo)致藥物的安全性問題,，甚至可能對(duì)患者的健康產(chǎn)生威脅。例如,，某些研究表明,，ECP（大腸桿菌多肽）的存在與抗ECP抗體和抗rhGH抗體的產(chǎn)生相關(guān)，可能導(dǎo)致免疫反應(yīng)等,。

HCP殘留含量也被認(rèn)為是生物制品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）,，是工藝穩(wěn)健性監(jiān)測(cè)的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，也是產(chǎn)品的重要質(zhì)控指標(biāo),。對(duì)于HCP的法規(guī)要求是多層次,、多方面的，旨在確保生物制藥產(chǎn)品的安全性,、有效性和質(zhì)量,。許多國家和地區(qū)的藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)都要求生物藥物在上市前必須進(jìn)行HCP殘留的檢測(cè)。這是為了確保藥物的安全性和有效性,，滿足法規(guī)要求,。制藥企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)法規(guī)要求,，采用合適的檢測(cè)方法和控制策略，確保HCP殘留量在可接受范圍內(nèi),。

1.國際法規(guī)要求：

ICH Q6B指南：國際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）的Q6B指南指出,，需要根據(jù)ICH準(zhǔn)則采用敏感且經(jīng)過驗(yàn)證的有效方法來監(jiān)控殘留的HCP，其殘留量通常要求小于100ppm,。
美國藥典（USP）：USP<1132>章節(jié)規(guī)定,，用一種靈敏度較高的方法檢測(cè)藥品中的HCP，其含量應(yīng)該低于檢測(cè)限（通常小于100ppm,，即1mg總蛋白中HCP含量應(yīng)小于100ng，也即<0.01%）,。

歐洲藥典（EP）：EP 2.6.34中規(guī)定,，在生物制品中，HCP的含量應(yīng)當(dāng)小于0.1%,。

2.國家/地區(qū)藥典要求：

中國藥典（2020版）：

針對(duì)CHO細(xì)胞,，HCP殘留需要<0.05%（相當(dāng)于小于500ppm）。
針對(duì)E.coli,，HCP殘留需要<0.01%,。
其他國家：不同國家和地區(qū)的藥典可能有各自的HCP殘留標(biāo)準(zhǔn)，但都旨在確保生物制藥產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量,。

而在實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的宿主細(xì)胞蛋白殘留

檢測(cè)方法如下：

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

原理：利用特異性抗體與宿主蛋白結(jié)合,，通過測(cè)定抗原-抗體反應(yīng)來定量宿主蛋白的殘留水平。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高,，可用于定量檢測(cè),。
缺點(diǎn)：需要有針對(duì)特定HCPs的抗體，可能產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果,。
自動(dòng)化：可以使用自動(dòng)化工作站,，如Biomek i7，來提高準(zhǔn)確性和檢測(cè)通量,。

二維電泳-質(zhì)譜聯(lián)用法（2D-PAGE-MS）

原理：基于蛋白質(zhì)分子量和等電點(diǎn)差異進(jìn)行分離,，通過質(zhì)譜分析進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。
優(yōu)點(diǎn)：可檢測(cè)更廣泛的HCPs,，提供全面的蛋白質(zhì)譜,。
缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，需要較高的技術(shù)水平,。

多肽映射法

原理：通過蛋白質(zhì)酶切,、高效液相色譜、質(zhì)譜等步驟,，獲得蛋白質(zhì)的多肽圖譜,，進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析,。
優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高,，適用于復(fù)雜樣品的分析,。
缺點(diǎn)：操作步驟復(fù)雜，需要較高的技術(shù)水平和專業(yè)設(shè)備,。

電泳法

包括CIE（毛細(xì)管電泳）,、SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）等,。
優(yōu)點(diǎn)：反應(yīng)時(shí)間短、靈敏性高（如CIE）,。SDS-PAGE簡(jiǎn)便,、快速、重復(fù)性好,。
缺點(diǎn)：分辨率低（如CIE,、SDS-PAGE）、不能精確定量（如SDS-PAGE）,。

質(zhì)譜法

原理：直接檢測(cè)蛋白質(zhì)的質(zhì)量和結(jié)構(gòu),，通過比對(duì)目標(biāo)蛋白和宿主蛋白的質(zhì)譜圖譜進(jìn)行定量分析。
優(yōu)點(diǎn)：高靈敏度,、高分辨率,，可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)宿主蛋白。
缺點(diǎn)：需要復(fù)雜的樣品準(zhǔn)備和數(shù)據(jù)分析過程,。

生物活性測(cè)定法

原理：通過測(cè)定宿主蛋白對(duì)生物活性的影響來驗(yàn)證殘留,。
優(yōu)點(diǎn)：提供宿主蛋白殘留對(duì)藥物活性的直接影響信息。
缺點(diǎn)：可能在特定情況下不夠敏感或特異性,。

在選擇宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)方法時(shí),，需要考慮多個(gè)因素，包括所需的靈敏度和準(zhǔn)確性,、樣品的復(fù)雜性,、以及可用的設(shè)備和技術(shù)水平。通常,，結(jié)合多種方法可以確保最終藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性,。

今天小貝帶來了

基于ELISA的自動(dòng)化檢測(cè)宿主細(xì)胞蛋白殘留標(biāo)準(zhǔn)化流程——標(biāo)準(zhǔn)化無人值守

圖1. 自動(dòng)化HCP檢測(cè)流程展示

更高線性的標(biāo)曲——高精度移液體現(xiàn)

自動(dòng)化

人工

圖2. 使用Cygnus^TM CHO HCP ELISA 試劑盒對(duì)于自動(dòng)化再現(xiàn)性的驗(yàn)證。手工和自動(dòng)化的標(biāo)曲比較結(jié)果如圖二A和B所示,，對(duì)比R2的數(shù)值自動(dòng)化動(dòng)化結(jié)果更好,。

穩(wěn)定的結(jié)果保證——高重現(xiàn)性