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細(xì)胞計數(shù)儀知識分享系列 I 鑒定識別篇

貝克曼庫爾特生命科學(xué) 2024-05-27 | 閱讀：862

上一篇《細(xì)胞計數(shù)儀知識分享系列 I 性能檢測篇》中，我們發(fā)現(xiàn)全自動細(xì)胞計數(shù)儀在檢測細(xì)胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準(zhǔn)確性上，都比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。那么大家可能會問：

導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么,？

目前市場上許多公司都自詡所賣的細(xì)胞計數(shù)儀是全自動的,，那我們又如何區(qū)分哪個是全自動,，哪個是半自動,？

本文我們將給大家介紹下全自動和

半自動細(xì)胞計數(shù)儀性能差異的原因

以及如何快速地鑒別全/半自動細(xì)胞計數(shù)儀

PART 01

全自動和半自動

細(xì)胞計數(shù)儀性能差異的原因

首先,，我們對臺盼藍(lán)染色的圖像法細(xì)胞計數(shù)儀的檢測過程做下回顧，下面6個步驟是細(xì)胞計數(shù)和活率分析的基本流程,。

傳統(tǒng)顯微鏡下手工細(xì)胞計數(shù)（如下所示）,，前面5步操作都要操作人員來手動完成。因為人為操作帶來的誤差不可避免,，導(dǎo)致結(jié)果差異有時會很大,，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍,。并且隨著樣品數(shù)越多,，操作人員容易造成眼疲勞，無法繼續(xù)進行有效并準(zhǔn)確地計數(shù),。

手工顯微鏡法細(xì)胞計數(shù)的照片和計算方法

因此,，插板式半自動細(xì)胞計數(shù)儀應(yīng)運而生，它省去了操作人員肉眼觀察和統(tǒng)計死活細(xì)胞數(shù)的步驟,，但剩下幾個步驟還需要手動完成,，包括吸液加樣、臺盼藍(lán)染色和上樣分析（有時還要手動對焦）,，測試結(jié)束后需更換新的細(xì)胞計數(shù)板做下一批樣品,。

半自動細(xì)胞計數(shù)儀的三種計數(shù)板手動加樣照片

相比全自動細(xì)胞計數(shù)儀，半自動細(xì)胞計數(shù)儀存在以下問題導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果重復(fù)性和準(zhǔn)確性要差：

細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)的體積需要移液槍手動定量,，而且混勻也是手動來完成,，因此不可避免地產(chǎn)生人為操作誤差。
從搖瓶培養(yǎng)的幾十毫升或生物反應(yīng)器幾十到上百升的細(xì)胞樣品中,，吸取20-30uL體積的樣品進行檢測,，由于取樣量少，容易引起取樣代表性差,，結(jié)果不準(zhǔn)確的問題,。
儀器一般只拍1-3張照片，分析統(tǒng)計的細(xì)胞數(shù)量相對少,，結(jié)果的代表性相對較差,。

同時，染色后的細(xì)胞樣品通過移液槍加到計數(shù)板上,，有時會操作不當(dāng)產(chǎn)生氣泡,，特別是細(xì)胞培養(yǎng)液中含有較多易產(chǎn)生氣泡的蛋白，這種問題更容易發(fā)生,。另外,，廢棄的細(xì)胞計數(shù)板還會產(chǎn)生二次固體污染,，這些問題目前都沒有好的解決方法。

那有沒可能細(xì)胞的混懸和染色,，以及細(xì)胞的計數(shù)和分析過程全部實現(xiàn)自動化,，同時不用手動更換新的細(xì)胞計數(shù)板而自動做下一個樣品呢？答案是使用全自動細(xì)胞計數(shù)分析儀,。

PART 02

如何快速鑒別

全自動和半自動細(xì)胞計數(shù)儀,？

結(jié)合細(xì)胞計數(shù)和活率分析的檢測過程，除了要放入待檢測的樣品外,，全自動細(xì)胞計數(shù)儀可以讓儀器自動完成樣品的混懸,、臺盼藍(lán)染色、細(xì)胞拍照和識別,、測試結(jié)果的分析統(tǒng)計和顯示,。

相比半自動細(xì)胞計數(shù)儀，全自動細(xì)胞計數(shù)儀有以下一些特點可供大家快速鑒別,。

1. 自動混懸和臺盼藍(lán)染色

全自動細(xì)胞計數(shù)儀的一個顯著特點是能夠自動完成細(xì)胞的吹打混懸和臺盼藍(lán)染色,。

要擁有這個特點，儀器必須具備下面兩個功能,。

首先,，儀器內(nèi)部要有步進馬達，準(zhǔn)確控制細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)等體積混合,。然后,，儀器還要可以自動混勻染色，能將細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)進行有效地染色處理,。而這兩步操作,，對于半自動細(xì)胞計數(shù)儀而言，還只能通過手動操作來完成,。

2.自動管路清洗

全自動細(xì)胞計數(shù)儀內(nèi)部有一個流通池，可用于流過的細(xì)胞拍照成像,，所以就不需要細(xì)胞計數(shù)板這個耗材,。當(dāng)樣品檢測結(jié)束后，儀器需要自動對流通池進行清洗,，并在清洗結(jié)束后將管路內(nèi)液體切換到對細(xì)胞友好的磷酸緩沖液,，等待下一個樣品的檢測。

所以,，除了對細(xì)胞拍照的光路系統(tǒng)和用于數(shù)據(jù)控制的電子系統(tǒng)外,，相比半自動細(xì)胞計數(shù)儀，全自動細(xì)胞計數(shù)儀還有一個清洗管路的液路系統(tǒng),，并通過八通閥的切換完成細(xì)胞的染色和管路清洗,。因此，一般大家看到的全自動細(xì)胞計數(shù)儀體積會相對大一些。

全自動細(xì)胞計數(shù)儀檢測原理示意圖和結(jié)構(gòu)組成

3. 高通量和不間斷檢測

全自動細(xì)胞計數(shù)儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測,。待測樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上,，根據(jù)軟件中設(shè)置好的分析條件，儀器會自動按要求分別對這些細(xì)胞樣品完成計數(shù)和活率分析,。

Vi-CELL BLU細(xì)胞計數(shù)儀的兩種上樣模塊

以貝克曼庫爾特生命科學(xué)Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)儀為例,，使用轉(zhuǎn)盤一次可以放21個樣品，而使用孔板最多可以放96個樣品進行分析測試,。若使用24位轉(zhuǎn)盤,，在檢測過程中還可以實現(xiàn)不間斷上樣測試，即樣品測試過程中,，還可以放入新的待測樣品,。所以，在操作便捷性上,，全自動細(xì)胞計數(shù)儀也是優(yōu)于半自動細(xì)胞計數(shù)儀,。

總之，全自動細(xì)胞計數(shù)儀在細(xì)胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差,，同時儀器能自動清潔管路和過夜清洗,，而且可以高通量上樣和不間斷測試。因此,，不管是細(xì)胞計數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,，還是儀器操作的便捷性上，全自動細(xì)胞計數(shù)儀都比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢,。

希望大家可以通過此文介紹的以上這些特點,，在面對琳瑯滿目的細(xì)胞計數(shù)儀時，能夠快速有效地鑒別出細(xì)胞計數(shù)儀是“真”全自動還是“假”全自動,。

除了儀器測試結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,，對于生物制藥的質(zhì)量控制和生產(chǎn)部門，儀器軟件的法規(guī)符合度也是一個很重要的點,。所以,，下一期的細(xì)胞計數(shù)儀知識分享，我們將為您提供法規(guī)符合度方面的內(nèi)容介紹,。

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