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已認(rèn)證
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上一篇《細(xì)胞計數(shù)儀知識分享系列 I 性能檢測篇》中,我們發(fā)現(xiàn)全自動細(xì)胞計數(shù)儀在檢測細(xì)胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準(zhǔn)確性上,都比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。那么大家可能會問:
導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么,?
目前市場上許多公司都自詡所賣的細(xì)胞計數(shù)儀是全自動的,,那我們又如何區(qū)分哪個是全自動,,哪個是半自動,?
本文我們將給大家介紹下全自動和
半自動細(xì)胞計數(shù)儀性能差異的原因
以及如何快速地鑒別全/半自動細(xì)胞計數(shù)儀
PART 01
全自動和半自動
細(xì)胞計數(shù)儀性能差異的原因
首先,,我們對臺盼藍(lán)染色的圖像法細(xì)胞計數(shù)儀的檢測過程做下回顧,下面6個步驟是細(xì)胞計數(shù)和活率分析的基本流程,。
傳統(tǒng)顯微鏡下手工細(xì)胞計數(shù)(如下所示),,前面5步操作都要操作人員來手動完成。因為人為操作帶來的誤差不可避免,,導(dǎo)致結(jié)果差異有時會很大,,甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍,。并且隨著樣品數(shù)越多,,操作人員容易造成眼疲勞,無法繼續(xù)進行有效并準(zhǔn)確地計數(shù),。
手工顯微鏡法細(xì)胞計數(shù)的照片和計算方法
因此,,插板式半自動細(xì)胞計數(shù)儀應(yīng)運而生,它省去了操作人員肉眼觀察和統(tǒng)計死活細(xì)胞數(shù)的步驟,,但剩下幾個步驟還需要手動完成,,包括吸液加樣、臺盼藍(lán)染色和上樣分析(有時還要手動對焦),,測試結(jié)束后需更換新的細(xì)胞計數(shù)板做下一批樣品,。
半自動細(xì)胞計數(shù)儀的三種計數(shù)板手動加樣照片
相比全自動細(xì)胞計數(shù)儀,半自動細(xì)胞計數(shù)儀存在以下問題導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果重復(fù)性和準(zhǔn)確性要差:
細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)的體積需要移液槍手動定量,,而且混勻也是手動來完成,,因此不可避免地產(chǎn)生人為操作誤差。
從搖瓶培養(yǎng)的幾十毫升或生物反應(yīng)器幾十到上百升的細(xì)胞樣品中,,吸取20-30uL體積的樣品進行檢測,,由于取樣量少,容易引起取樣代表性差,,結(jié)果不準(zhǔn)確的問題,。
儀器一般只拍1-3張照片,分析統(tǒng)計的細(xì)胞數(shù)量相對少,,結(jié)果的代表性相對較差,。
同時,染色后的細(xì)胞樣品通過移液槍加到計數(shù)板上,,有時會操作不當(dāng)產(chǎn)生氣泡,,特別是細(xì)胞培養(yǎng)液中含有較多易產(chǎn)生氣泡的蛋白,這種問題更容易發(fā)生,。另外,,廢棄的細(xì)胞計數(shù)板還會產(chǎn)生二次固體污染,,這些問題目前都沒有好的解決方法。
那有沒可能細(xì)胞的混懸和染色,,以及細(xì)胞的計數(shù)和分析過程全部實現(xiàn)自動化,,同時不用手動更換新的細(xì)胞計數(shù)板而自動做下一個樣品呢?答案是使用全自動細(xì)胞計數(shù)分析儀,。
PART 02
如何快速鑒別
全自動和半自動細(xì)胞計數(shù)儀,?
結(jié)合細(xì)胞計數(shù)和活率分析的檢測過程,除了要放入待檢測的樣品外,,全自動細(xì)胞計數(shù)儀可以讓儀器自動完成樣品的混懸,、臺盼藍(lán)染色、細(xì)胞拍照和識別,、測試結(jié)果的分析統(tǒng)計和顯示,。
相比半自動細(xì)胞計數(shù)儀,全自動細(xì)胞計數(shù)儀有以下一些特點可供大家快速鑒別,。
1. 自動混懸和臺盼藍(lán)染色
全自動細(xì)胞計數(shù)儀的一個顯著特點是能夠自動完成細(xì)胞的吹打混懸和臺盼藍(lán)染色,。
要擁有這個特點,儀器必須具備下面兩個功能,。
首先,,儀器內(nèi)部要有步進馬達,準(zhǔn)確控制細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)等體積混合,。然后,,儀器還要可以自動混勻染色,能將細(xì)胞樣品和臺盼藍(lán)進行有效地染色處理,。而這兩步操作,,對于半自動細(xì)胞計數(shù)儀而言,還只能通過手動操作來完成,。
2.自動管路清洗
全自動細(xì)胞計數(shù)儀內(nèi)部有一個流通池,可用于流過的細(xì)胞拍照成像,,所以就不需要細(xì)胞計數(shù)板這個耗材,。當(dāng)樣品檢測結(jié)束后,儀器需要自動對流通池進行清洗,,并在清洗結(jié)束后將管路內(nèi)液體切換到對細(xì)胞友好的磷酸緩沖液,,等待下一個樣品的檢測。
所以,,除了對細(xì)胞拍照的光路系統(tǒng)和用于數(shù)據(jù)控制的電子系統(tǒng)外,,相比半自動細(xì)胞計數(shù)儀,全自動細(xì)胞計數(shù)儀還有一個清洗管路的液路系統(tǒng),,并通過八通閥的切換完成細(xì)胞的染色和管路清洗,。因此,一般大家看到的全自動細(xì)胞計數(shù)儀體積會相對大一些。
全自動細(xì)胞計數(shù)儀檢測原理示意圖和結(jié)構(gòu)組成
3. 高通量和不間斷檢測
全自動細(xì)胞計數(shù)儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測,。待測樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上,,根據(jù)軟件中設(shè)置好的分析條件,儀器會自動按要求分別對這些細(xì)胞樣品完成計數(shù)和活率分析,。
Vi-CELL BLU細(xì)胞計數(shù)儀的兩種上樣模塊
以貝克曼庫爾特生命科學(xué)Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)儀為例,,使用轉(zhuǎn)盤一次可以放21個樣品,而使用孔板最多可以放96個樣品進行分析測試,。若使用24位轉(zhuǎn)盤,,在檢測過程中還可以實現(xiàn)不間斷上樣測試,即樣品測試過程中,,還可以放入新的待測樣品,。所以,在操作便捷性上,,全自動細(xì)胞計數(shù)儀也是優(yōu)于半自動細(xì)胞計數(shù)儀,。
總之,全自動細(xì)胞計數(shù)儀在細(xì)胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差,,同時儀器能自動清潔管路和過夜清洗,,而且可以高通量上樣和不間斷測試。因此,,不管是細(xì)胞計數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,,還是儀器操作的便捷性上,全自動細(xì)胞計數(shù)儀都比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢,。
希望大家可以通過此文介紹的以上這些特點,,在面對琳瑯滿目的細(xì)胞計數(shù)儀時,能夠快速有效地鑒別出細(xì)胞計數(shù)儀是“真”全自動還是“假”全自動,。
除了儀器測試結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,,對于生物制藥的質(zhì)量控制和生產(chǎn)部門,儀器軟件的法規(guī)符合度也是一個很重要的點,。所以,,下一期的細(xì)胞計數(shù)儀知識分享,我們將為您提供法規(guī)符合度方面的內(nèi)容介紹,。
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