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請(qǐng)查收！您的全自動(dòng)高通量蛋白純化方案已發(fā)布,！

貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué) 2024-05-27 | 閱讀：953

在綠色生物制造和合成生物學(xué)等研究領(lǐng)域中,，高質(zhì)量的蛋白分離和純化是研究目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的重要步驟。傳統(tǒng)的分離純化方法通量低,、耗時(shí)長(zhǎng),、均一性差，全自動(dòng)高通量蛋白純化系統(tǒng)在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域已開(kāi)始廣泛運(yùn)用,，從樣本前處理工序,，到不同類(lèi)型的蛋白純化流程，可實(shí)現(xiàn)多管線自動(dòng)化平行實(shí)驗(yàn),，具有穩(wěn)定的工藝流程，可極大提高實(shí)驗(yàn)效率,，節(jié)約時(shí)間和人力成本,；同時(shí)還可以進(jìn)行數(shù)據(jù)交互,，實(shí)現(xiàn)樣本溯源和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)管理。今天小貝給大家整理了幾種常見(jiàn)好用的蛋白純化方案助力您的科學(xué)研究,。

磁珠捕獲特異性標(biāo)簽蛋白,，因其純化步驟精簡(jiǎn)成熟被廣泛應(yīng)用，圖1是磁珠純化流程示意圖,。小貝為您量身定制蛋白純化全流程自動(dòng)化方案：使用Biomek i系列液體工作站,，整合核酸/蛋白提取儀，實(shí)現(xiàn)高效高通量自動(dòng)化蛋白純化,，極大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間和科研精力,。

圖1 磁珠純化流程

圖2 Biomek i系列液體處理工作站展示圖

Biomek i系列液體工作站配置96通道和靈活8通道加樣器，適配各種商品化試劑盒和用戶自配試劑,，輕松實(shí)現(xiàn)試劑分裝和高通量樣本純化,。同時(shí)工作站支持多設(shè)備整合，可進(jìn)行后期無(wú)限升級(jí),，添加離心機(jī),、酶標(biāo)儀等設(shè)備助力全流程自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)。

圖3 磁珠純化方法截圖及純化結(jié)果

高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過(guò)結(jié)合核酸/蛋白提取儀實(shí)現(xiàn)極簡(jiǎn)快速蛋白純化,，也可以通過(guò)自動(dòng)化液體工作站結(jié)合磁力架完成,。使用該功能時(shí)僅需要通過(guò)軟件的簡(jiǎn)易命令行即可完成，如圖3所示,，工作站機(jī)械抓手會(huì)根據(jù)純化流程將Binding Buffer,、Beads、Washing Buffer等試劑自動(dòng)搬運(yùn)到指定位置,，使用磁套進(jìn)行磁珠轉(zhuǎn)運(yùn),，單次可以完成96個(gè)樣本純化，濃度穩(wěn)定在0.5-0.8mg/ml,，96孔板純化時(shí)間約60min,，節(jié)省槍頭成本，省時(shí)省力,。

圖4 親和層析柱蛋白純化法實(shí)驗(yàn)流程

RoboColumn是一種小型色譜柱,，用于抗體、蛋白質(zhì),、多肽等的全自動(dòng)平行色譜分離,，其純化流程如圖4所示。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結(jié)合,，配置Span8固定針,，可實(shí)現(xiàn)多通道自動(dòng)化的平行層析實(shí)驗(yàn)流程，顯著縮短工藝開(kāi)發(fā)時(shí)間；同時(shí)還可以進(jìn)行數(shù)據(jù)追蹤,，實(shí)現(xiàn)樣本溯源,，減少重復(fù)工作。

圖5 RoboColumn ALP模塊結(jié)構(gòu)及Span8固定針示意圖

W1：廢液槽,；B1：收集板載架,；C1：柱載架

Biomek液體工作站可以實(shí)現(xiàn)臺(tái)面整合RoboColumn ALP模塊，通過(guò)軟件流程式編輯方法,，控制ALP板位自動(dòng)位移,，實(shí)現(xiàn)液體收集，輕松完成蛋白純化,，圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結(jié)果,，實(shí)驗(yàn)中1.56mg蛋白上樣，經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg,，純化得率達(dá)到84%,，8通道操作時(shí)間約為80min。

圖6 調(diào)用RoboColumn方法界面及純化結(jié)果展示

圖7 PhyTip法自動(dòng)化純化關(guān)鍵流程

PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱,，采用槍頭式裝置,，純化樹(shù)脂被填充于槍頭尖端，由自動(dòng)化液體處理工作站加載PhyTip,，可以實(shí)現(xiàn)單通道到96通道靈活樣品數(shù)純化,，其純化流程如圖7所示，可對(duì)微克級(jí)到毫克級(jí)的蛋白進(jìn)行純化,。

圖8 PhyTip實(shí)物圖,、PhyTip純化方法及結(jié)果展示圖

Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結(jié)合，利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡(jiǎn)單,！如圖8所示,，加樣器加載PhyTip，分別在平衡液,、蛋白樣品,、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化，單次可處理96個(gè)樣品,，收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料),，純化后經(jīng)BCA蛋白定量測(cè)定蛋白含量穩(wěn)定在400ug左右，優(yōu)于手工對(duì)照實(shí)驗(yàn)340ug的結(jié)果,，96孔板操作時(shí)間約為90min,。

小結(jié)