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請查收,！您的全自動高通量蛋白純化方案已發(fā)布,！

貝克曼庫爾特生命科學 2024-05-27 | 閱讀：881

在綠色生物制造和合成生物學等研究領(lǐng)域中,，高質(zhì)量的蛋白分離和純化是研究目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的重要步驟,。傳統(tǒng)的分離純化方法通量低,、耗時長、均一性差,，全自動高通量蛋白純化系統(tǒng)在生命科學研究和生物制藥領(lǐng)域已開始廣泛運用,，從樣本前處理工序，到不同類型的蛋白純化流程,，可實現(xiàn)多管線自動化平行實驗,，具有穩(wěn)定的工藝流程，可極大提高實驗效率,，節(jié)約時間和人力成本,；同時還可以進行數(shù)據(jù)交互，實現(xiàn)樣本溯源和實驗數(shù)據(jù)管理,。今天小貝給大家整理了幾種常見好用的蛋白純化方案助力您的科學研究,。

磁珠捕獲特異性標簽蛋白，因其純化步驟精簡成熟被廣泛應(yīng)用,，圖1是磁珠純化流程示意圖,。小貝為您量身定制蛋白純化全流程自動化方案：使用Biomek i系列液體工作站，整合核酸/蛋白提取儀,，實現(xiàn)高效高通量自動化蛋白純化，極大節(jié)省實驗時間和科研精力,。

圖1 磁珠純化流程

圖2 Biomek i系列液體處理工作站展示圖

Biomek i系列液體工作站配置96通道和靈活8通道加樣器,，適配各種商品化試劑盒和用戶自配試劑，輕松實現(xiàn)試劑分裝和高通量樣本純化,。同時工作站支持多設(shè)備整合,，可進行后期無限升級，添加離心機,、酶標儀等設(shè)備助力全流程自動化實驗,。

圖3 磁珠純化方法截圖及純化結(jié)果

高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過結(jié)合核酸/蛋白提取儀實現(xiàn)極簡快速蛋白純化，也可以通過自動化液體工作站結(jié)合磁力架完成,。使用該功能時僅需要通過軟件的簡易命令行即可完成,，如圖3所示,，工作站機械抓手會根據(jù)純化流程將Binding Buffer、Beads,、Washing Buffer等試劑自動搬運到指定位置,，使用磁套進行磁珠轉(zhuǎn)運，單次可以完成96個樣本純化,，濃度穩(wěn)定在0.5-0.8mg/ml,，96孔板純化時間約60min，節(jié)省槍頭成本,，省時省力,。

圖4 親和層析柱蛋白純化法實驗流程

RoboColumn是一種小型色譜柱，用于抗體,、蛋白質(zhì),、多肽等的全自動平行色譜分離，其純化流程如圖4所示,。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結(jié)合,，配置Span8固定針，可實現(xiàn)多通道自動化的平行層析實驗流程,，顯著縮短工藝開發(fā)時間,；同時還可以進行數(shù)據(jù)追蹤，實現(xiàn)樣本溯源,，減少重復工作,。

圖5 RoboColumn ALP模塊結(jié)構(gòu)及Span8固定針示意圖

W1：廢液槽；B1：收集板載架,；C1：柱載架

Biomek液體工作站可以實現(xiàn)臺面整合RoboColumn ALP模塊,，通過軟件流程式編輯方法，控制ALP板位自動位移,，實現(xiàn)液體收集,，輕松完成蛋白純化，圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結(jié)果,，實驗中1.56mg蛋白上樣,，經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg，純化得率達到84%,，8通道操作時間約為80min,。

圖6 調(diào)用RoboColumn方法界面及純化結(jié)果展示

圖7 PhyTip法自動化純化關(guān)鍵流程

PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱，采用槍頭式裝置,，純化樹脂被填充于槍頭尖端,，由自動化液體處理工作站加載PhyTip，可以實現(xiàn)單通道到96通道靈活樣品數(shù)純化,，其純化流程如圖7所示,，可對微克級到毫克級的蛋白進行純化,。

圖8 PhyTip實物圖、PhyTip純化方法及結(jié)果展示圖

Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結(jié)合,，利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡單,！如圖8所示，加樣器加載PhyTip,，分別在平衡液,、蛋白樣品、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化,，單次可處理96個樣品,，收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料)，純化后經(jīng)BCA蛋白定量測定蛋白含量穩(wěn)定在400ug左右,，優(yōu)于手工對照實驗340ug的結(jié)果,，96孔板操作時間約為90min。

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