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密度梯度離心（isodensity centrifugation method）又稱為區(qū)帶離心,。

該方法的優(yōu)點是可以同時使樣品中幾種或全部組分分離,，具有良好的分辨率,，分離效果好,，可一次獲得較純組分。

缺點是離心時間較長,，需制備梯度液,，操作要求高。

按照離心分離原理,，密度梯度離心又可分為速率區(qū)帶離心法（rate zonal centrifugation method,，R-Z）和等密度離心法 (isopycnic centrifugation method)。

速率區(qū)帶離心也可稱為等區(qū)密度離心,，是根據(jù)樣品中不同組分粒子所具有的不同的體積大小和不同的沉降系數(shù)將混合樣品進行離心分離提純,。

離心時將需要分離的樣品溶液置于由密度梯度材料（如蔗糖、氯化銫 (CsCI),、溴化鈉等）形成的梯度液柱上面,，樣品粒子的密度必須大于梯度液柱中任一點的密度，否則無法得到理想的區(qū)帶離心效果,。離心時,，混合樣品中不同的組分將在梯度液柱的不同位置分別形成各自的區(qū)帶，選擇適合的轉(zhuǎn)速和時間進行離心,，當各組分區(qū)帶距離拉得遠時,，結(jié)束離心，然后將區(qū)帶取出,。這樣只需通過一次離心就可以把混合樣品中的各組分分離提純,，其純度和回收率均可滿足要求。

優(yōu)點是一次分離純化,，組分的沉降系數(shù)相差 20% 以上的即可選用此法,，分辨力高，操作熟練可以將組分沉降系數(shù)相差 5%～10% 的樣品很好的分離,。

缺點是材料的條件限制,，樣品液濃度不能太高，否則操作條件很難控制,，同時此法與差速離心法相比,，處理樣品的量要小的多,。

圖 1 速率區(qū)帶離心

速率區(qū)帶離心的時間必須嚴格控制，不能太短,，否則樣品區(qū)帶不清,，時間也不能太長，否則待分離組分可能沉底,。需要分離的樣品顆粒的沉降速度取決于顆粒形狀,、大小,、密度及離心力等因素,。離心前后樣品的狀態(tài)如圖 1 所示。

速率區(qū)帶離心經(jīng)典的應用就是通過蔗糖密度梯度離心,，進行各種亞細胞器（核糖體,、線粒體、Exosome 等）和病毒顆粒（病毒載體,、疫苗等）的純化,。例如，我們在上一期中得到的 70S 核糖體沉淀,，經(jīng)過水解后,，可利用蔗糖密度梯度離心，進一步分離純化得到 50S 和 30S 的兩個亞基,。具體的實驗流程如下：

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* 修訂日期：2020/10/16

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