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【熱點(diǎn)應(yīng)用】Zetasizer精準(zhǔn)表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度

馬爾文帕納科 2024-07-23 | 閱讀：2012

本文通過介紹馬爾文帕納科納米粒度及電位儀Zetasizer Ultra用于慢病毒載體顆粒粒徑及載體滴度表征的實(shí)驗(yàn)設(shè)置及檢測(cè)結(jié)果,。讓您快速實(shí)現(xiàn)慢病毒載體（LV）關(guān)鍵質(zhì)量屬性的評(píng)估。

慢病毒載體（Lentiviral vector, LV）是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng)，可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果?？捎行У馗腥旧窠?jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞,、心肌細(xì)胞,、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞,、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,，從而達(dá)到良好的的基因治療效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，如原代細(xì)胞,、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,，使用慢病毒載體,，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長(zhǎng)期,、穩(wěn)定表達(dá),。（部分內(nèi)容來自百度百科）

所以，在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中慢病毒載體（LV）與腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）同為主流的病毒載體系統(tǒng),。其顆粒粒徑約為90-120nm,。

在慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝中，有無團(tuán)聚體（aggregate）,，以及載體滴度（titer）的高低是重點(diǎn)考察的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）,。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對(duì)LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征，快速實(shí)現(xiàn)CQAs的測(cè)量,。

Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀

實(shí)驗(yàn)方法設(shè)定

使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿（ZEN2112）進(jìn)行相應(yīng)的粒徑和滴度測(cè)定,。樣品測(cè)試體積為20μL，LV折射率,、吸收率分別設(shè)置為1.45和0.001,。

分析結(jié)果

通過多角度動(dòng)態(tài)光散射（multi-angle DLS, MADLS）技術(shù)，我們對(duì)LV粒度大小及分布進(jìn)行表征（圖1） ,。圖中有兩個(gè)粒徑分布峰,，分別位于106.4以及430.6nm，這說明體系中除了LV單體,，還有團(tuán)聚體產(chǎn)生。

圖1 LV樣品的光強(qiáng)粒徑分布圖

圖2 LV樣品的載體滴度

此外,，除了基于MADLS技術(shù)得到的顆粒的準(zhǔn)確粒徑分布圖,，我們還得到對(duì)應(yīng)尺寸的載體滴度信息（圖2）?？梢钥吹絃V單體的顆粒濃度約1x10¹²個(gè)顆粒/mL,，團(tuán)聚體顆粒濃度約為1x10¹⁰個(gè)顆粒/mL，僅為單體的1%,。單體和聚集體濃度相差較大的情況下,，Zetasizer仍可很好的區(qū)分單體和聚集體。

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