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Prominence nano 納升液相色譜儀
Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng),，可在納升流量下進(jìn)行流速的溶劑輸送,。按照應(yīng)用不同，可以配置成1D和2D系統(tǒng),。
Prominence nano具備納升流速下的高保留時(shí)間重復(fù)性,，非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點(diǎn)。
納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸
LC-20AD nano采用了新的RFC技術(shù),，可對(duì)每一個(gè)泵進(jìn)行獨(dú)立的流速控制,，在納升流速下保證好的流量精度。**的RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應(yīng)器控制,，確保在任何時(shí)間的流速測(cè)量,。同時(shí)，流量傳感器配置了精確的溫度控制機(jī)制,，以減少不確定的環(huán)境因素對(duì)溶劑輸送的影響,。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性,，在300nL/min時(shí)候保留時(shí)間重復(fù)性的RSD小于0.2%。
RFC系統(tǒng)的原理
泵內(nèi)配置了一個(gè)流速傳感器,，可持續(xù)監(jiān)測(cè)泵輸出的納升流速。為了保證流速在設(shè)定的范圍內(nèi),，輸液泵采用反饋控制模式,，傳感器的監(jiān)測(cè)到真實(shí)流速后可以自動(dòng)調(diào)整分流比例,，從而保證流速的準(zhǔn)確性,。另外，分流后的流動(dòng)相在混合前就經(jīng)過(guò)回流管路回到溶劑瓶,，不會(huì)浪費(fèi)溶液。
低溶劑消耗
RFC系統(tǒng)可確保每個(gè)泵輸出的溶劑分流后又回到流動(dòng)相瓶中,。就算在高壓梯度分析中,，兩種溶劑在分離后并不會(huì)像廢棄物一樣排出,，從而降低溶劑消耗并減少對(duì)環(huán)境的影響,。
FCV納升閥，低死體積
FCV nano
FCV納升閥體積為25nL,，在納升范圍內(nèi)幾乎不會(huì)展寬,。在納升LC使用捕集柱進(jìn)樣和二維系統(tǒng)中,，F(xiàn)CV 納升閥是不可或缺的,。FCV 納升閥通過(guò)使用強(qiáng)化的定子和聚醚醚酮的轉(zhuǎn)子,，可以大大降低樣品的吸附,，同時(shí)獲得很好的耐用性,。
高靈敏度分析
SIL-20AC
SIL-20AC的直接進(jìn)樣功能與FCV納升閥的低擴(kuò)射性能相結(jié)合可實(shí)現(xiàn)微量體積樣品的進(jìn)樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對(duì)進(jìn)樣的樣品進(jìn)行捕集濃縮，從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析。而且，SIL-20AC被公認(rèn)為交叉污染低的自動(dòng)進(jìn)樣器,，這些特征都可以滿足高靈敏度MS分析的要求。
2維LC的輔助控制軟件
輔助控制軟件可對(duì)2維LC進(jìn)行便捷設(shè)置，在軟件圖形界面上可輕松對(duì)2維HPLC的進(jìn)行復(fù)雜梯度編程,，設(shè)定流速等，然后生成方法文件并下載至儀器中進(jìn)行控制,，而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當(dāng)前狀態(tài)。簡(jiǎn)便的設(shè)置可避免單獨(dú)使用LC控制軟件帶來(lái)的一系列的操作問(wèn)題,。
Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結(jié)合了離子交換和反向色譜模式（如下圖所示）,，每種色譜模式都獨(dú)立運(yùn)行,，兩種模式的結(jié)合可進(jìn)行有效的分離,。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備Nano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進(jìn)行濕法蛋白組學(xué)分析，也可以與點(diǎn)靶儀和MALDI-TOF質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行干法蛋白組學(xué)分析,。
易操作的一維體系
Nano-Assist一維LC設(shè)置圖
1D 納升LC系統(tǒng)對(duì)于確認(rèn)SDS PAGE分離前的蛋白質(zhì)十分有效,，1D系統(tǒng)只需要非常簡(jiǎn)單的操作就可以實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然,，輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的,。
高保留時(shí)間重復(fù)性
蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異，而樣本中又存在許多特征相似的多肽,，對(duì)保留時(shí)間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù),，配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過(guò)0.2% 的保留時(shí)間重復(fù)性,。
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復(fù)性
2維 LC的高分辨率
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復(fù)性
在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí),，單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量,；所以,，為了實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離,，需要進(jìn)行2D分離以保證足夠的峰容量,。Prominence nano系統(tǒng)可以進(jìn)行2D分析,，結(jié)合陽(yáng)離子交換和反相模式,，為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù),。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖，1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個(gè)組分,，2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果,。
分析條件
1維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動(dòng)相 | 甲酸銨緩沖液 濃度STEP梯度 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 ?m I.D.) L-column （micro） |
捕集時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
脫鹽溶劑 | 水/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.) |
流動(dòng)相 | 梯度洗脫 A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測(cè) | LCMS-IT-TOF |
樣本 | 酵母蛋白中的蛋白 （相當(dāng)于200 fmol的） |
* 分別利用1維和2維中不同類型的柱體進(jìn)行其他組合的分離模式也是可行的,。在這種情況下,，分離或檢測(cè)方法由于使用的移動(dòng)相分離模式或類型之間的相互作用,，可能會(huì)有一些限制,。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過(guò)nano ESI接口連接LCMS使用,，還可連接到配有自動(dòng)點(diǎn)靶儀的MALDI-TOFMS儀器,。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰,，需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內(nèi)精確控制流速,，Prominence nano系統(tǒng)的完全滿足了此需要,。
酶解BSA樣品的UV色譜圖（500fmol）
分析條件
檢測(cè)器 | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速M(fèi)onoCap (250 mmL. × 100 μm I.D.) |
流動(dòng)相 | 1,、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) 2,、梯度洗脫 |
流速 | 1 μL/min |
溫度 | 環(huán)境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點(diǎn)靶間隔 | 12 秒的點(diǎn)斷 每點(diǎn)液體：200nL（不包括基質(zhì)） |
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