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活體近紅外光學(xué)成像系統(tǒng)
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1.1體內(nèi)熒光成像系統(tǒng)
基本原理
熒光探針通過尾靜脈注射或者口服的方式進(jìn)入小動物體內(nèi),;
激發(fā)光源照射小動物,熒光探針發(fā)出熒光,;
熒光經(jīng)過濾光片和鏡頭進(jìn)入檢測器,,信號給到電腦進(jìn)行成像。
1.2體內(nèi)熒光壽命成像系統(tǒng)
近紅外熒光壽命成像系統(tǒng)
基本原理
基于熒光成像系統(tǒng),,控制激光器與檢測器的時間同步,;
Labview編程,設(shè)置采集參數(shù),,進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,;
同時,在Labview軟件上進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,,得到*終壽命成像結(jié)果,。
2. 光學(xué)和性能
檢測器:InAsGa CCD,-55℃,,-65℃,,-85℃和-190 ℃四款相機(jī)可選。配有接口轉(zhuǎn)接環(huán),,方便C口鏡頭隨意切換,。
2.1 高靈敏檢測器 CCD參數(shù)
* 制冷溫度越低,暗電流越小,,靈敏度越高,,越適合弱信號的采集
2.2 電腦自動化調(diào)焦和移動樣品
相機(jī)鏡頭,激發(fā)光源和集成模塊
成像視野200mm * 200 mm可調(diào)(購買的鏡頭)和20 mm ~ 20 mm可調(diào)(自制的鏡頭),;
高透波段900 nm ~ 1700 nm;
激光器808 nm,,980 nm及1064 nm等波長功率可選;
濾光片波長及尺寸可選;
電控調(diào)焦及電控移動樣品,,更便于操作,;
多光束集成裝置,滿足多光源激發(fā)和切換,。
下圖:不同熒光波段下,,活體腿部血管的成像效果,。
下圖:雙鏡頭切換使用,滿足不同成像視野需求,。激發(fā)光源便捷切換,,電動調(diào)焦和移動樣品。
2.3 先進(jìn)的樣品處理裝置
麻醉系統(tǒng)和溫度調(diào)節(jié)裝置
提供氣體麻醉裝置,,可持續(xù)長久的麻醉小動物,,保持實(shí)驗(yàn)過程中小動物的相對靜止;
控溫平臺保證小動物(特別是裸鼠等)體溫正常,,盡量減小實(shí)驗(yàn)室低溫環(huán)境對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的影響,。
下圖:配有麻醉裝置、控溫平臺
2.4 多功能一體化數(shù)據(jù)采集和處理軟件
熒光成像用的是PI的LightFiled軟件 ,,可自動或手動獲取圖片,;也可以制作成視頻;圖片可疊加強(qiáng)度,,也可以取平均強(qiáng)度,;可進(jìn)行TTL調(diào)制;與Labview和Matlab等編程軟件無縫連接,;
熒光壽命成像用的是自主用編寫的Labview工作界面,,具有獨(dú)立版權(quán)。從采集的參數(shù)設(shè)置,,到焦點(diǎn)調(diào)節(jié),,以及*后壽命成像的數(shù)據(jù)處理,閾值調(diào)整等,,皆可實(shí)現(xiàn),。
所有結(jié)果都可以后期用Matlab處理了。
下圖:熒光成像使用LightFiled
下圖:熒光壽命成像使用Labview
3. 基于熒光成像的研究案例
★應(yīng)用案例 1近紅外成像指導(dǎo)外科手術(shù)
利用該熒光成像系統(tǒng)和相應(yīng)的近紅外二區(qū)發(fā)射的熒光探針,,實(shí)現(xiàn)對小鼠的近紅外成像指導(dǎo)的外科手術(shù),。可識別并切除 <1 mm的腫瘤,。
探針材料:NaGdF4:5%Nd@NaGdF4
激發(fā)光源:808 nm laser
參考文獻(xiàn):Wang,, P.; Fan, Y.; Lu,, L.; Liu,, L.;Fan, L.; Zhao,, M.; Xie,, Y.; Xu, C.; Zhang,, F.,,Nat. Commun.2018,,9(1), 2898.
下圖:DCNPs稀土納米顆粒表面修飾DNA和目標(biāo)多肽,,可在腫瘤位置持久停留(長達(dá)6h),,對其進(jìn)行光學(xué)成像,利于卵巢癌轉(zhuǎn)移瘤切除的外科手術(shù),。
下圖:對比于近紅外一區(qū)發(fā)射的熒光探針(ICG),,1060 nm發(fā)射的稀土納米顆粒,具有更高的光學(xué)穩(wěn)定性和更深的模擬組織穿透深度,。
★應(yīng)用案例 2活體腸胃藥物釋放監(jiān)控
利用該熒光成像系統(tǒng)和巧妙設(shè)計的競爭吸收近紅外發(fā)射熒光探針,,實(shí)現(xiàn)對活體的腸胃藥物釋放過程的實(shí)時動態(tài)監(jiān)控,并進(jìn)行半定量的檢測,。
探針材料:NaGdF4:5%Nd@NaGdF4
激發(fā)光源:808 nm laser.
參考文獻(xiàn): Wang,, R.; Zhou, L.; Wang,, W.; Li, X.;Zhang,, F.,,Nat. Commun.2017,8(1),, 1038.
下圖:在pH大于等于8時,, SSPI分散開來,染料及藥物釋放出來,,730 nm激發(fā)載體,,再次發(fā)射出1060 nm的熒光。根據(jù)熒光強(qiáng)度的恢復(fù)大小定量藥物的釋放量,。808 nm激發(fā)用于跟蹤藥物,。
下圖:合成材料的電鏡圖設(shè)計微米尺寸載體:稀土納米顆粒靜電吸附于表面,介孔通道中載有連接藥物的NPTAT染料,。稀土顆??梢员?30 nm和808 nm激發(fā)產(chǎn)生1060 nm的熒光,染料在730 nm處也有吸收,。由于染料具有極大的吸收截面,,微米載體在730 nm激發(fā)下,無法產(chǎn)生1060 nm發(fā)射,。載體表面有pH響應(yīng)SSPI用于保護(hù)介孔通道中的染料不會釋放出去,。
★應(yīng)用案例 3:活體炎癥成像和檢測
利用該熒光成像系統(tǒng)和炎癥響應(yīng)性的近紅外二區(qū)探針,可以實(shí)現(xiàn)活體中活性氧物種的高信噪比成像和高精確性的檢測,。
探針材料:NaGdF4:5%Nd@NaGdF4
激發(fā)光源:808 nm laser.
參考文獻(xiàn):Zhao,, M.; Wang,, R.; Li, B.; Fan,, Y.;Wu,, Y.; Zhu, X.; Zhang,, F.,,Angew. Chem. Int. Ed.2018, 58,, 2050-5054.
下圖:DCNPs稀土納米顆粒表面修飾生物內(nèi)源性的物種GSH,,GSH遇到活性氧之后,會發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng),,誘發(fā)納米顆粒聚集,。達(dá)到點(diǎn)亮活性氧富集的部位。
下圖:透射電鏡表征單分散納米顆粒在體外遇到活性氧,,發(fā)生強(qiáng)烈的偶聯(lián)反應(yīng),,形成二硫鍵,導(dǎo)致顆粒聚集,。
★應(yīng)用案例 4:活體深組織成像監(jiān)控心率
近紅外二區(qū)成像得到更高分辨率的血管成像,;更高的成像分辨率和更深組織穿透深度,可以對活體心率進(jìn)行準(zhǔn)確的監(jiān)控和測試,。
探針材料:FD-1080
激發(fā)光源:1064 nm laser.
參考文獻(xiàn):Li,, B.; Lu, L.; Zhao,, M.; Lei,, Z.;Zhang, F.,, Angew. Chem. Int. Ed. 2018,, 57 (25), 7483-7487.
下圖:**設(shè)計合成近紅外二區(qū)激發(fā)和發(fā)射的小分子探針,,相對于ICG,,該探針具有更高的穩(wěn)定性
下圖:由于長波長熒光具有低的散射,從體外成像深度和分辨率的結(jié)果看,,波長越長,,成像的穿透深度和分辨率越高。
★應(yīng)用案例 5:評估臨床藥物的療效
臨床前藥物的藥理評估對藥物的推廣和療效評價非常重要,。利用近紅外活體熒光成像系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對降血壓藥物的動力學(xué)藥理評估和監(jiān)控,。
探針材料:FD-1080 and DMPC
激發(fā)光源:1064 nm laser.
參考文獻(xiàn):Sun, C.; Li, B.; Zhao,, M.; Wang,, S.;Lei, Z.; Lu,, L.; Zhang,, H.; Feng, L.; Dou,, C.; Yin,, D.; Xu, H.; Cheng,, Y.;Zhang,, F., J. Am. Chem. Soc. 2019,, 141 (49),, 19221-19225.
下圖:FD-1080與DMPC混合重組裝,形成J聚集體,,染料的吸收和發(fā)射主峰都紅移到1300 nm之后,。實(shí)現(xiàn)有機(jī)染料的長波長激發(fā)和發(fā)射。
下圖:波長越長,,光子的散射越小,,通過體外實(shí)驗(yàn),對比不同成像窗口,,發(fā)現(xiàn)1500nm之后成像的分辨率**。
★應(yīng)用案例 6:活體胃酸檢測
設(shè)計高亮的抗淬滅長波長發(fā)射有機(jī)探針,,利用其pH相應(yīng)的特性,,通過比例熒光實(shí)現(xiàn)對胃酸的高精確檢測。
探針材料:BTC系列探針
激發(fā)光源:1064 nm laser.
參考文獻(xiàn): Wang,, S.; Fan,, Y.; Li, D.; Sun,, C.;Lei,, Z.; Lu, L.; Wang,, T.; Zhang,, F., Nat. Commun. 2019,, 10 (1),, 1058.
下圖:以腈染料為基礎(chǔ)進(jìn)行改造,可以得到具有很強(qiáng)抗溶劑淬滅的系列BTC染料。該染料的激發(fā)/發(fā)射波長主峰可以達(dá)到近紅外二區(qū),。同時,,由于其抗淬滅性質(zhì),使其具有很強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,,光穩(wěn)定性也遠(yuǎn)優(yōu)于ICG,。
下圖:對比ICG的成像效果,BTC1070具有高分辨和高信噪比的腿部血管和淋巴成像,。
★應(yīng)用案例7:監(jiān)控藥物的肝毒性
設(shè)計長波長且可調(diào)的系列近紅外探針,,利用比例熒光對藥物誘導(dǎo)的肝毒性進(jìn)行定量實(shí)時的檢測。
探針材料:BTC系列探針
激發(fā)光源:1064 nm laser.
參考文獻(xiàn): Lei,, Z.; Sun,, C.; Pei, P.; Wang,, S.;Li,, D.; Zhang, X.; Zhang,, F.,,. Angew. Chem. Int. Ed. 2019, 58 (24),, 8166-8171.
★應(yīng)用案例8:腫瘤檢測
稀土離子的熒光壽命非常穩(wěn)定,,幾乎不受外界環(huán)境的干擾,也不隨活體組織的穿透深度而變化,,因此利用熒光壽命成像系統(tǒng)對生物標(biāo)志物進(jìn)行檢測,,具有極高的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。
探針材料:NaGdF4@NaGdF4:Yb,,Er@ NaGdF4 :Yb@ NaGdF4 :Nd
激發(fā)光源:808 nm laser.
參考文獻(xiàn):Fan,, Y.;Wang, P.; Lu,, Y.; Wang,, R.; Zhou, L.; Zheng,, X.; Li,, X.; Piper, J. A.; Zhang,,F(xiàn).,, Nat. Nanotechnol. 2018, 13 (10),, 941-946.
★應(yīng)用案例9:活體信息存儲和解析
將不同熒光壽命的材料編輯成二維碼,,空間上重疊植入到活體皮下,。熒光成像無法解析出二維碼信息,熒光壽命成像可以將兩種不同熒光壽命的二維碼解析出來,,得到活體信息存儲和解碼的過程,。更多的熒光壽命,實(shí)現(xiàn)更大的信息存儲,。
探針材料:NaYF4:Tm,,Er@NaYF4
激發(fā)光源:1208 nmlaser.
參考文獻(xiàn): Zhang, H.X.; Fan,, Y.; Pei,, P.; Sun, C. X.; Lu,, L. F.; Zhang,, F., Angew. Chem. Int. Ed.2019,, 58 (30),, 10153-10157.
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