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NEPA21高效基因轉(zhuǎn)染儀------適用于體外(In Vitro)和活體(In Vivo)

NEPA GENE公司專業(yè)研發(fā),、生產(chǎn)細(xì)胞電轉(zhuǎn)染儀及電融合儀等，其生產(chǎn)CUY21系列電轉(zhuǎn)染儀在研究領(lǐng)域中久負(fù)盛名,，已被數(shù)百篇文獻(xiàn)引用,，其中不乏高水平雜志的文章,，如Nature、Cell,、PNAS,、Genes & Dvelopment等,。

2011年,，NEPA GENE推出新一代全能型NEPA21高效基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。與傳統(tǒng)的電轉(zhuǎn)儀相比,，NEPA21采用全新設(shè)計(jì)的電轉(zhuǎn)程序,，特別適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、離體組織或動(dòng)物活體的轉(zhuǎn)染,。配合獨(dú)有的電壓衰減（Voltage Decay）設(shè)計(jì),，NEPA21可在獲得高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，提高細(xì)胞存活率,。

電轉(zhuǎn)染主要特點(diǎn)：

• 全新的四步法電轉(zhuǎn)程序

• 特別適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞,、離體組織或動(dòng)物活體的轉(zhuǎn)染

• 高轉(zhuǎn)染效率、高細(xì)胞存活率

• 電轉(zhuǎn)程序各項(xiàng)參數(shù)可見,、可調(diào),，適用性廣

• 不需要特殊的轉(zhuǎn)染試劑盒輔助，運(yùn)維成本低

熱點(diǎn)應(yīng)用：受精卵\ 胚胎的基因編輯

1,、體外受精卵電轉(zhuǎn)

與顯微注射相比,，NEPA21特有的電極可在體外單次電擊可實(shí)現(xiàn)幾枚至一百多枚的受精卵基因編輯，工作效率大大提高,，目前已應(yīng)用于鼠卵,、魚卵、爪蟾,、蠶卵,、絨猴等。

2,、宮內(nèi)胚胎電轉(zhuǎn)

3.i-GONAD 技術(shù)體內(nèi)受精卵電轉(zhuǎn)

受精卵顯微注射法或體外電穿孔法,， 是目前常見的KO/KI動(dòng)物的方法。然而,，這些技術(shù)需要費(fèi)時(shí)費(fèi)力的體外處理,，包括受精卵分離、基因?qū)?、體外培養(yǎng),、胚胎移植到孕母鼠等繁瑣復(fù)雜流程。Dr. Makoto Matsuyama實(shí)驗(yàn)室開發(fā)了一種簡單高效的體內(nèi)電轉(zhuǎn)方法,，稱為i-GONAD,，通過直接在孕鼠輸卵管壺腹部電轉(zhuǎn)染的方式完成受精卵轉(zhuǎn)染,，不需要上述復(fù)雜的體外處理。目前i-GONAD法成功進(jìn)行小鼠,、大鼠基因編輯,，也有望應(yīng)用于其它哺乳動(dòng)物，如豚鼠,、倉鼠,、牛、豬,、猴等,。

全新的四步法電轉(zhuǎn)程序：

一：電穿孔模式

高電壓、持續(xù)時(shí)間短,、多次脈沖,、電壓衰減

有效地在細(xì)胞膜上形成小孔，且對(duì)細(xì)胞損傷小

二：反向電穿孔模式

用于原位貼壁細(xì)胞/組織的轉(zhuǎn)染,，有效提高穿孔率,！

三：基因?qū)肽Ｊ?/span>

低電壓、持續(xù)時(shí)間長,、多次脈沖,、電壓衰減

幫助目標(biāo)分子（DNA或RNA等）進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，且對(duì)細(xì)胞損傷小

四：反向?qū)肽Ｊ?/strong>

獨(dú)有設(shè)計(jì),！有效提高導(dǎo)入效率,！

應(yīng)用范圍：

懸浮轉(zhuǎn)染

適用范圍：原代細(xì)胞、干細(xì)胞,、以及各種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞（如神經(jīng)細(xì)胞,、免疫 細(xì)胞及血液細(xì)胞等）

貼壁轉(zhuǎn)染

適用范圍：可以直接對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，省去了細(xì)胞消化,、再貼壁的步驟（對(duì)提高某些種類細(xì)胞的存活率十分重要）,！

離體組織轉(zhuǎn)染（Ex Vivo）

適用范圍：組織切片、腦切片,、器官,、胚胎等

活體轉(zhuǎn)染(In Vivo)

適用范圍：大腦、視網(wǎng)膜,、角膜,、肌肉、皮膚,、肝臟,、腎臟、睪丸,、卵巢等部分參考文獻(xiàn)：

• 細(xì)胞轉(zhuǎn)染儀（NEPA21,、CUY21系列）：

1. Barnabe-Heider et al.Genetic manipulation of adult mouse neurogenic niches by in vivo electroporation. Nature Methods,， 2008 Feb;5(2):189-96.

2. Shibata MA， et al. Combination therapy with short interfering RNA vectors against VEGF-C and VEGF-A suppresses lymph node and lung metastasis in a mouse immunocompetent mammary cancer model. Cancer Gene Ther. 2008 Dec;15(12):776-86.

3. Limura T and Pourquie O. Collinear activation of Hoxb genes during gastrulation is linked to mesoderm cell ingression.Nature,， 2006 Aug 3;442(7102):568-71.

4. Sanada K and Tsai LH. G Protein betagamma Subunits and AGS3 Control Spindle Orientation and Asymmetric Cell Fate of Cerebral Cortical Progenitors. Cell,， 2005 Jul 15;122(1):119-31

5. Ladher RK et al. FGF8 initiates inner ear induction in chick and mouse. Genes and Development， 2005 Mar 1;19(5):603-13.