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生命科學的研究已進入了細胞組學的研究,，科學家們渴求探究細胞深層次和綜合性信息，既提供細胞群體的群體信息,，也關注個體細胞的差異,，既能看到細胞表型的特點，更能研究細胞的功能，但目前的流式細胞技術已無法滿足科學家們的應用需求,。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多維全景流式細胞儀**次實現(xiàn)了從群體到個體,，從表型到功能的綜合細胞分析，**流式細胞技術進入了嶄新的時代,。

FlowSight是下一代專家級流式細胞儀

FlowSight是一款體積小巧,，但是功能強大的下一代專家級流式細胞儀。該系統(tǒng)革命性地設計提高了信噪比以及熒光檢測的靈敏度,。標配12個檢測通道,，除了傳統(tǒng)熒光強度信息，還能獲得“每個細胞”的明場,、暗場以及10個熒光圖像,。FlowSight可以*多配置四根激光管（405， 488,， 561,， 642 nm），并加配785nm激光器專用于SSC信號檢測,，同時還可配置96孔板自動上樣系統(tǒng)（AutoSampler）,。FlowSight具有低于10MESF的超高檢測靈敏度,，特別對于弱信號的檢測,，有明顯的優(yōu)勢。

FlowSight突破傳統(tǒng)流式局限,，實現(xiàn)圈門不再靠猜

FlowSight與其他傳統(tǒng)流式細胞儀不同之處在于它帶來了每個細胞的真實圖像,。對于每個細胞，它能夠生成12張圖片,。所獲得的圖片能夠鑒別來自細胞質(zhì),、細胞膜和細胞核的熒光。您只需點擊散點圖中的每個點或直方圖中的每個點,，即可查看與之對應的細胞圖片,。因此使用者再也不用靠猜測來判斷設門是否準確。在FlowSight中,，設門后,，使用者可以通過觀察所設門內(nèi)外的細胞圖片來確認設門是否準確。

FlowSight拓展了流式細胞技術的應用范圍,，獲得****的深入的細胞信息

1. 細胞周期細化分析

FlowSight可以將細胞周期分析和有絲分裂細胞分析結(jié)合起來,。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對THP-1細胞周期進行分析（如下圖左圖所示）,，通過觀察每個時期的細胞圖片,，F(xiàn)lowSight不僅可以分析細胞的G0/G1，S,，G2/M期,，還可將M期細分為分裂前期,，中期，晚期,，末期,，獲得*全面的細胞周期數(shù)據(jù)。

2. 八色免疫分型

免疫分型通常用來鑒別血細胞亞群,。FlowSight*多能夠同時檢測10色熒光,，**程度地滿足研究者的實驗需求。在這個例子中,，研究人員用抗CD45,， CD14， CD16,， CD19,， CD3， CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對細胞進行標記,。通過一系列設門分析,，他們鑒別了以下細胞類群： (A) CD3+ T細胞， CD4+ 輔助T細胞; (B) CD16+ 粒細胞; (C) CD19+ B 細胞; (D) CD14+ 單核細胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細胞.

3．NFkB核轉(zhuǎn)位研究

NF-κβ作為一種廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子,，被激活由胞漿轉(zhuǎn)入胞核,，從而參與炎癥反應、免疫反應,、細胞凋亡,、腫瘤發(fā)生等?？梢詫⒓毎撕蚇F-κβ分別用DAPI和FITC染色,，F(xiàn)lowSight可觀察每個細胞是否發(fā)生 NF-κβ核轉(zhuǎn)位，并量化分析NFkB核轉(zhuǎn)位程度以及發(fā)生核轉(zhuǎn)位細胞的比例,。

FlowSight革命性地光路設計,，實現(xiàn)獨特應用

FlowSight系統(tǒng)平臺也是由液流系統(tǒng)，光學系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成,。液流系統(tǒng)將樣本細胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動室中,，使細胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個流過檢測窗口,。光學系統(tǒng)中光源照射通過檢測窗口的細胞,，從而產(chǎn)生光信號。光源分為兩種,，其一用于產(chǎn)生明場細胞圖像,，另一種是用于產(chǎn)生熒光細胞圖像的激光器。光源照射細胞產(chǎn)生的光信號被大數(shù)值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構(gòu)成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）,。光信號在這里被分成不同波段投射到TDI CCD的相應檢測通道上,，產(chǎn)生一個明場細胞圖像，一個暗場細胞圖像（Side Scatter,，SSC）及至多10個不同熒光通道的細胞圖像,。FlowSight的光路系統(tǒng)能夠自動調(diào)整焦距，并實時測定細胞運動速度,，而其采用高端航空遙拍CCD進行信號采集,，信噪比比PMT提高10-20倍，上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細胞圖像的質(zhì)量和熒光信號的靈敏度,。

綜上,，F(xiàn)lowSight多維全景流式細胞儀，采用革命性的技術,，解決了傳統(tǒng)流式細胞儀無法獲得細胞個體信息的局限,，真正讓流式細胞儀睜開了“眼睛”，不僅可以對大量細胞進行統(tǒng)計學分析,，而且還能觀察細胞形態(tài),，極大地拓展了傳統(tǒng)流式細胞儀的應用。雖然FlowSight是在2011年推出的,，但是Amnis公司的下一代流式技術已經(jīng)非常成熟,，全球裝機已經(jīng)超過200臺，超過300篇文獻發(fā)表,，其中大量Nature,、Science和Blood等高水平文章,。